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人参皂苷Rg3可抑制小鼠肿瘤生长和逆转肿瘤的多药耐药性

上一篇 / 下一篇  2019-01-09 09:36:11

中医药文化博大精深,从中草药中开发抗肿瘤药物是目前国内外抗肿瘤新药开发的热点之一。人参皂苷Rg3是一种单体皂苷,其在小鼠结肠癌模型上的原发瘤切除后肝转移瘤的生长抑制作用和小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用上的研究发现,其不仅具有抑制肿瘤细胞增长的作用,还具有逆转肿瘤的多药耐药性作用。

如人参皂苷Rg3在小鼠结肠癌模型上的研究,在小鼠结肠癌模型的原发瘤切除之后,使用人参皂苷Rg3治疗10d,通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长,发现人参皂苷Rg3可以明显抑制小鼠肿瘤模型原发瘤切除后肝内转移瘤的生长。为了评估药物在临床前和临床研究中治疗癌症的效果,通常使用人类肿瘤细胞系或患者源性肿瘤移植到免疫缺陷小鼠体内的肿瘤动物模型。肿瘤动物模型可以让研究者了解临床药物的作用机制,是药物进行临床试验前的至关重要一步。美迪西可以根据客户的需求提供各种有效的动物模型,用来检测药物的有效性。实验动物有非人类灵长动物、狗、小鼠、大鼠、家兔、豚鼠、裸鼠等各种种类。

人参皂苷Rg3除了可以抑制小鼠结肠模型的血管生成及细胞凋亡,在其他肿瘤模型,如胃癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌等实体肿瘤中展开的研究发现,Rg3可抑制肿瘤新生血管形成,诱导肿瘤细胞凋亡,并能选择性地抑制肿瘤细胞转移,提高机体免疫功能。

肿瘤的多药耐药性(multidrug resistanceMDR)是导致肿瘤化疗失败的重要原因之一,人参皂苷Rg3在肺腺癌小鼠肿瘤模型的多耐药的逆转作用机制上的研究发现,人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多药耐药有逆转作用。

1、人参皂苷Rg3可抑制小鼠结肠癌模型原发瘤切除后肝转移瘤的生长

慢病毒转染建立稳定表达绿色荧光蛋白(green fluorescent proteinGFP)基因的BALB/c小鼠结肠腺癌细胞株(BALB/c micecolon adenocarcinoma cell lineCT-26),用细胞悬液法构建小鼠结肠癌肝转移瘤模型,分为原发瘤切除组、原发瘤未切除组、人参皂苷Rg3组。

采用切除原发瘤及人参皂苷Rg3治疗10d,通过小动物活体成像系统观察肝转移瘤的生长情况。应用组织切片苏木素-伊红染色法,观察肿瘤转移灶情况,SP免疫组织化学法检测转移瘤MVD及细胞增殖,TUNEL技术检测转移瘤细胞凋亡。

应用慢病毒转染获得稳定表达高强度绿色荧光的CT-26-GFP细胞株。结肠癌肝转移模型治疗结束后,用波长470nm的蓝光激发,通过荧光活体成像系统观察剖离肝脏转移灶发出绿色荧光。原发瘤切除后,人参皂苷Rg3组平均肝转移灶荧光值较原发瘤未切除组及原发瘤切除组有明显的下降(314.17±54.23388.82±25.97427.18±44.31);人参皂苷Rg3组、原发瘤未切除组和原发瘤切除组转移瘤发生率分别为40%50%100%;平均肝脏质量分别为2.92g±0.60g3.80g±0.33g3.98g±0.52g;转移瘤血管密度分别为27.10±3.4142.60±8.4262.40±5.08;转移瘤细胞Ki67的表达分别为34.70±6.4654.30±8.9865.20±3.82;转移瘤细胞凋亡指数分别为28.37±3.8612.50±2.999.90±2.88

因此稳定表达绿色荧光蛋白的CT-26-GFP细胞系及其动物模型可以为原发瘤切除研究提供理想的实验材料,应用小动物活体成像系统能够客观定量评价肿瘤在小鼠肝脏的生长情况。人参皂苷Rg3明显抑制小鼠原发瘤切除后肝内转移瘤的生长,明显抑制转移瘤的血管生成及细胞增殖,促进细胞凋亡。

2、人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药性作用的研究

观察人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多耐药的逆转作用并探讨其机制。将32只接种获得性多药耐药Lewis肺癌细胞的小鼠随机分成4组:荷瘤对照组、多柔比星(ADM)组、人参皂苷Rg3组和人参皂苷Rg3联合多柔比星(ADM)组。各组予以相应干预,观察肿瘤生长情况,肿瘤接种24天处死全部小鼠,剥取皮下移植肿瘤,称瘤重,计算抑瘤率,收集移植瘤标本行免疫组织化学检测P-糖蛋白(Pglycaproteinp-Gp)和多药耐药相关蛋白1的表达,并行RTPCR半定量检测多药耐药基因(muhidrug resistanceMDR1mRNA、多药耐药相关蛋白1multidrug resistanceassociated protein1MRP1mRNA表达。

结果发现:

1)各用药组肿瘤的生长受到不同程度抑制,瘤重低于对照组,其抑瘤率分别为10.5%、36.3%、56.2%,联合用药组抗瘤作用进一步增强。

2)免疫组织化学:pGpMRP1蛋白质的表达具有一致性,对照组和ADM组表达较高,而人参皂苷Rg3组和联合组表达明显降低,其中对照组和ADM组比较,人参皂苷R驴组和联合组比较,差异无统计学意义(P0.05);而人参皂苷Rg3组和联合组与对照组和ADM组比较差异均有统计学意义(P0.01)。

3RTPCR:与对照组和ADM组比较,人参皂苷Rg3组和联合组MDR1 mRNA荧光强度降低,人参皂苷R妒组、联合组同对照组及ADM组比较MDR1mRNA相对量减小,差异均有统计学意义(P0.01),而对照组同ADM组比较,人参皂苷Rg3组同联合组比较差异未见统计学意义,MRP1mRNA的表达与MDR1mRNA类似。

因此人参皂苷Rg3对小鼠肺腺癌多药耐药有逆转作用,其作用机制可能是下调MDR1mRNAMRP1mRNA及其蛋白的表达。

人参皂苷Rg3是一种从中草药中提取的抗癌活性成分,它被科学家寄予厚望,是一种潜力巨大的抗癌药物。在小鼠肿瘤模型上展开的研究发现,其不仅能够小鼠结肠癌模型原发瘤切除后肝内转移瘤的生长,还对小鼠肺腺癌多药耐药有逆转作用,因此人参皂苷Rg3具有明显的抗肿瘤活性。同时我们期待在未来能够从中草药中提取出更多的有抗癌活性的单体化合物,让中医药为人类抗癌做出更大贡献。

 


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