菊苣酸在人CYP450酶作用下的代谢研究

菊苣酸是从菊科植物菊苣干燥全草提取的一种水溶性酚酸类化合物，临床前研究和药理学研究表明菊苣酸具有增强免疫功能、抗炎作用，并能抑制透明质酸酶，保护胶原蛋白Ⅲ免受可导致降解的自由基的影响。同时还有研究表明菊苣酸具有抑制HIV-1和HIV-1整合酶的作用。细胞色素P450(CYP450)是药物和其他内、外源物的主要代谢酶，可催化多种药物、前毒物、前致癌物等外源性物质氧化和还原代谢和类固醇激素、花生四烯酸等内源性物质的合成和代谢。有研究者进行了菊苣酸对人CYP450酶的体外抑制作用研究。

体外运用肝CYP450酶技术进行药物代谢动力学研究可以预知候选化合物在体内代谢物，通过对这些代谢物活性和毒性研究，寻找更为安全有效的化合物，大大减少新药开发和研究费用。中药成分复杂，其药效学基础大多数仍然需要经过CYP450酶代谢，并有可能进一步影响其他药物代谢或者产生相互作用。深入研究中药有效成分对药物代谢酶系统影响规律有助于阐明中药药理学作用分子机理与药物相互作用机理，为临床合理安全地使用中药提供理论基础。在中国GLP机构排名中靠前的美迪西，其药代动力学实验室已经通过CFDA的GLP认证，实验研究遵循ICH、CFDA和FDA的指导原则，可以根据客户需求设计并开展体内、体外药代动力学试验，为客户提供一整套药代动力学评价和优化服务。

在新药开发研究早期，采用P450酶技术进行体外药物代谢动力学研究可以使我们了解药物在实验动物和人之间代谢方式、途径及差异，为毒性研究提供重要信息。有研究者考察了菊苣酸(CRA)对人源CYP450酶的体外抑制作用，并研究CRA在Caco-2细胞中的转运特征及CRA在大鼠原位肠血管灌流模型和大鼠体内的药物代谢动力学。方法是

（1）在混合人肝微粒体孵育体系中，分别以非那西丁O-脱乙基化(CYP1A2)、安非他酮羟基化(CYP2B6)、阿莫地喹去乙基化(CYP2C8)、双氯芬酸4’-羟基化(CYP2C9)、S-美芬妥英4’-羟基化(CYP2C19)、右美沙芬O-去甲基化(CYP2D6)、咪达唑仑1’-羟基化(CYP3A4/5)和睾酮6β-羟基化(CYP3A4/5)反应作为7种CYPP450酶亚型代谢活性的标志，并用阳性抑制剂对试验体系进行验证。建立LC-MS/MS法检测各特征性反应的代谢物生成量，并计算CRA的IC50值，通过代谢转化的变化来考察CRA对人肝微粒体中CYP450酶7种亚型的体外抑制作用。

(2)建立了Caco-2细胞中CRA的测定方法，以P-gp底物地高辛作为阳性对照，考察CRA在不同浓度(1μM、10μM和100μM)时其在Caco-2细胞单层上的跨膜双向转运情况。

(3)建立了大鼠原位肠血管灌流模型，通过十二指肠给药研究肠对CRA的吸收。

(4)大鼠24只随机分为四组，口服CRA低(25mg/kg)、中(50mg/kg)、高(100mg/kg)三个剂量组和一个静脉注射组(2mg/kg)，采用建立的LC-MS/MS法测定血浆中CRA及其代谢物CAFA和CA的浓度，运用药动学软件DAS2.0计算出相应的药动学参数。

论文作者通过研究发现：

(1)CRA对CYP450酶7种亚型(CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4/5(底物为咪达唑仑、睾酮))均没有明显的抑制作用。

(2)CRA在不同浓度(1μM、10μM和100μM)时，从腔面到基底面(AP→BL)的表观渗透系数(Papp)值分别为(0.68±0.07)×10^-6cm/sec、(0.85±0.04)×10^-6cm/sec和(0.84±0.05)×10^-6cm/sec，从基底面到腔面(BL→AP)的Papp值分别为(0.70±0.09)×10^-6cm/sec、(0.83±0.10)×10^-6cm/sec和(0.85±0.09)×10^-6cm/sec，外排比率ER值均接近1。

(3)十二指肠给药后，肠血管灌流模型中CRA在灌流液中的浓度随时间的变化而增大，在90min时趋于稳定，肠吸收率为(12.6±0.57)%。

(4)大鼠口服CRA后在体内表现为二室模型，达峰时间晚，消除较慢。大鼠口服低、中、高剂量CRA后的药动学参数:药时曲线下面积(AUC(0-∞))分别为7886.8±208.9μg/L*h、35468.8±1737.4μg/L*h、45422.1±398.4μg/L*h；半衰期(T1/2z)分别为4.79±1.09h、5.15±0.9h、4.80±0.70h；清除率(CLz)分别为3.3±0.1L/h/kg、1.4±0.07L/h/kg、2.2±0.02L/h/kg；表观分布容积(Vz)分别为22.5±4.9L/kg、10.4±1.4L/kg、15.2±2.3L/kg；最大血药浓度(Cmax)分别为1097.7±84.4μg/L、3666.0±195.4μg/L和5597.0±325.0μg/L；达峰时间(Tmax)均为4.0h。大鼠尾静脉注射2.0mg/kgCRA后的药动学参数:AUC(0-∞)为51432.7±3650.2μg/L*h；T1/2z为4.5±0.4h；CLz为0.04±0.003L/h/kg；Vz为0.25±0.034L/kg。

研究结果发现CRA对人CYP450酶无抑制作用，表明其在临床药物配伍中不会对其他药物造成潜在的有关肝药酶抑制方面的药物相互作用风险；CRA在大鼠体内的绝对生物利用度较低，在大鼠体内存在明显的代谢，其肠细胞跨膜转运通透性较差，跨膜方式可能主要为被动转运。

随着对P450酶系研究的不断深入和对其功能、调控及表达的进一步认识，将有助于认识它在药物代谢中的作用，进行菊苣酸对人CYP450酶的药物代谢动力学作用研究，为阐明药物代谢个体差异分子基础，从而充分发挥药物疗效，减少或避免不良反应的发生，为指导临床用药个体化提供科学依据。