羟基喜树碱是治疗结直肠癌的喜树碱类药物之一，然而其在治疗过程中容易出现肿瘤的多药耐药性。人结肠癌羟基喜树碱耐药细胞株SWll16/HCPT是研究消化道肿瘤多药耐药现象的理想模型。进行SW1116/HCPT细胞的酵母双杂交文库构建，为更好地探讨人结肠癌羟基喜树碱的多药耐药性现象和机制，阐明羟基喜树碱耐药结肠癌细胞内的耐药蛋白之间的相互作用提供了研究基础。还有研究者发现抑制或沉默Akt基因表达可逆转SW1116/HCPT细胞的耐药性。
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1、SW1116/HCPT细胞的cDNA文库构建及多药耐药分子机制研究
有研究者构建了羟基喜树碱耐药结肠癌细胞株SW1116/HCPT细胞的酵母双杂交cDNA文库[1]。方法是，研究者用TRIzol从SW1116/HCPT细胞提取总RNA，采用CLONTECHSMART(switchingmechanismat5’endofRNAtranscript)技术和同源重组(homologousrecombination)的方法构建SW1116/HCPT细胞的cDNA文库。
结果发现提取的RNA的A260/A280为1.98，甲醛变性琼脂糖凝胶电泳示出28SrRNA、18SrRNA及5SrRNA3条特异性带，28S与18S带浓度及亮度比值约为2。文库dscDNAsmear较长分布在0.1-5kb，成长瀑布条带，而且在接近1kb的区域有密集的带子，为高丰度表达基因。依据生长菌落计数，共获得(1.2-1.9)×106个转化子，重组率达93.7%，文库插入片段大小为0.2-5kb。该研究成功构建了SW1116/HCPTcDNA文库。
还有研究者进行了Swll16／HCPT的多药耐药分子机制研究[2]，研究者应用药物浓度递增法建立人结肠癌羟基喜树碱耐药细胞株Swll16／HCPT：细胞计数法测定细胞生长曲线；四唑蓝(MTT)比色法进行体外药物敏感实验；流式细胞仪测定细胞周期分布；细胞染色体染色进行核型分析；聚合酶链反应(PCR)一酶联免疫吸附测定(ELISA)检测细胞端粒酶活性。
研究结果发现应用药物浓度递增法成功建立了人结肠癌羟基喜树碱耐药细胞株Swll16／HCPT，后者与多种化疗药物存在交叉耐药现象。这种多药耐药性的改变不是因为基因的缺失，而可能是因为基因的突变，或表达量的改变所致。细胞周期的改变是肿瘤细胞对羟基喜树碱耐药的一种主要表现。
2、逆转人结肠癌SW1116/HCPT细胞多药耐药性的研究
有研究者研究了阻断磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol3-kinase，PI3K)/丝氨酸-苏氨酸激酶(seride-threonineproteinkinase，又称Akt)信号通路对逆转耐羟基喜树碱(hydroxycamptothecin，HCPT)人结肠癌SW1116/HCPT细胞多药耐药性的影响[3]。方法是采用western印迹分析法检测亲本SW1116细胞和耐HCPT细胞株SW1116/HCPT中Akt及磷酸化Akt(phospho-Akt，p-Akt)蛋白的表达水平。应用针对PI3K/Akt信号通路的小分子抑制剂LY294002或siRNA干扰的方法分别抑制或沉默Akt蛋白的表达；MTT法检测抑制或沉默Akt蛋白表达后，HCPT对SW1116/HCPT细胞生存率的影响；实时荧光定量PCR及蛋白质印迹法检测对耐药转运体三磷酸腺苷结合盒转运体G(2ATP-bindingcassettetransporterG2，ABCG2)mRNA及蛋白表达的影响；罗丹明123(rhodamine123，Rh123)法检测对SW1116/HCPT细胞药物外排功能的影响。
结果发现western印迹分析检测结果发现，耐药SW1116/HCPT细胞中p-Akt的表达水平明显高于亲本SW1116细胞(P<0.01)。小分子抑制剂LY294002及靶向Akt基因的Akt-siRNA均能明显降低p-Akt的表达水平，增加细胞对HCPT的药物敏感性(P值均<0.01)，有明显的多药耐药逆转作用。LY294002作用48h可使耐药转运体ABCG2mRNA的表达水平下调(74.82±4.71)%，蛋白表达水平下调(58.24±4.78)%(P值均<0.01)，并且耐药蛋白体的转运功能也明显受到抑制，细胞内Rh123的浓度增加了(1.45±0.12)倍(P<0.01)。沉默Akt基因后ABCG2mRNA的表达水平下降了(59.63±5.14)%，蛋白表达水平下降了(44.41±2.56)%(P值均<0.01)，细胞内Rh123的浓度增加了(1.22±0.10)倍(P<0.01)。
因此PI3K/Akt信号通路可正向调节耐药基因ABCG2的表达，在调节HCPT诱导的多药耐药过程中发挥重要作用。
肿瘤的多药耐药性可以影响结肠癌的化疗效果。进行SW1116/HCPT细胞的酵母双杂交文库构建研究，能够更好地探究肿瘤多药耐药性机制。进行人结肠癌羟基喜树碱耐药细胞的耐药机制及逆转耐药性的研究，为探索有效治疗结肠癌的药物提供了研究基础。
[1]结肠癌羟基喜树碱耐药细胞SW1116/HCPT酵母双杂交cDNA文库的构建和鉴定[J].
[2]人结肠癌羟基喜树碱多药耐药的分子机制研究[J].
[3]抑制或沉默Akt基因表达可逆转人结肠癌耐药SW1116/HCPT细胞的耐药性[J].
