含蛋白质转导域的Ngb 融合蛋白的原核表达、纯化及其生物学活性的初步研究

摘要 以SD 大鼠脑组织RNA 为模板，利用RT-PCR 技术，将HIV-1 反式激活蛋白(TAT)中具有蛋白质转导功能的9 个氨基酸序列，即蛋白质转导域(PTD)基因与脑红蛋白(Ngb)基因融合，应用T-A 克隆技术将融合基因与pMD19-T simple 载体连接，经测序正确后克隆至表达载体pET28b 中，转化感受态E.coli BL21 (DE3) plysS，得到的转化子经IPTG 诱导后获得可溶性表达，并经蛋白质印迹检测进一步鉴定.表达产物经Ni2+ 亲和纯化层析、脱盐后在原代培养的大鼠皮质神经元进行生物学活性检测，结果显示，TAT PTD-Ngb 融合蛋白可以转运入皮质神经元内，在48 h 内可检测到其存在，并能提高缺氧条件下皮质神经元存活率、减少缺氧诱导的皮质神经元的凋亡. 这一结果为进一步研究TAT PTD-Ngb 的神经保护机制提供了线索，并可能为神经系统疾病尤其是脑血管疾病、神经系统退行性疾病提供一个新的治疗策略.