用高效液相色谱法检测食品中亚硝胺残留的含量

　　内容摘要：检测步骤 ①样品前处理：参照气相色谱一热能分析仪法。 ②衍生反应：取二氯甲烷浓缩提取液l mI。，于具塞小试管中，加溴水氢冰乙酸0.03 mL，混匀。置红外灯加热器上(50℃)加热30 min，通高纯N2，挥去二氯甲烷。滴1滴0.02%酚酞指示剂，依次加0.2 mLNR H20(1+1)、0.01 mol·L-1 Cu(NO2)2溶液0.10 mL，准确移入5%二硫化碳氯仿溶液0.05 mL，振摇1 min，静置分层，弃水相。水洗有机相数次，至水相无色。加0.01mol·L-1 HgCl2 溶液0.10 mL，振摇有机相至棕色全褪去，取有机相5uL注入HPLC仪检测。

　　高效液相色谱法

　　1.仪器

　　HPLC仪(具紫外检测器)。

　　2.试剂

　　参照气相色谱一质谱法。

　　3.仪器工作条件

　　①紫外检测器波长273nm。

　　②色谱柱：uNucleosilCN5(2.6mm×250mm)。

　　③流动相：15%乙酸乙酯-85%正己烷(0.01ug·kg-1HgCl2饱和)。

　　④流速：0.8mL/min。

　　⑤柱温：室温。

　　⑥进样体积：5uL。

　　4.检测步骤

　　①样品前处理：参照气相色谱一热能分析仪法。

　　②衍生反应：取二氯甲烷浓缩提取液lmI。，于具塞小试管中，加溴水氢冰乙酸0.03mL，混匀。置红外灯加热器上(50℃) 加热30min，通高纯N2，挥去二氯甲烷。滴1滴0.02%酚酞指示剂，依次加0.2mLNRH20(1+1)、0.01mol·L-1 Cu(NO2)2溶液0.10mL，准确移入5%二硫化碳氯仿溶液0.05mL，振摇1min，静置分层，弃水相。水洗有机相数次，至水相无色。加 0.01mol·L-1 HgCl2 溶液0.10mL，振摇有机相至棕色全褪去，取有机相5uL注入HPLC仪检测。

　　5.标准曲线制备

　　按上述衍生反应，分别取标准溶液5uL，注入HPLC仪，以峰面积为纵坐标、标准液的含量为横坐标，绘制标准曲线。

　　6.计算

　　X = A1×V1×Cs×1000/(A2×V2×m)

　　式中：

　　X——食品中亚硝胺化合物含量，ug·kg-1;

　　A1、A2——样品浓缩液与标准液中亚硝胺化合物的峰面积，mm2。;

　　V1——样品浓缩液体积，mL;

　　V2——样液进样体积，mL;

　　Cs——标准溶液中亚硝胺化合物浓度，ug/mI;

　　m——样品质量，g。