病原性真菌的检测

　　一、实验目的

　　了解真菌接种、培养的一般程序;掌握单细胞真菌和多细胞真菌的菌丝、孢子的形态特点;掌握真菌不染色标本直接检查方法。

　　二、实验内容

　　(一)真菌的菌落观察

　　观察真菌菌落的形态特点及颜色有助于病原性真菌的鉴定。一般观察真菌的菌落必需将真菌培养于沙保弱氏培养基(俗称大培养)，经数日致十数日的培养后才可看到典型菌落。

　　1. 材料

　　(1)临床标本(可疑真菌感染)：毛发或皮屑。

　　(2)真菌菌种：新生隐球菌，白假丝酵母菌，絮状表皮癣菌。

　　(3)沙保弱氏葡萄糖斜面培养基(含青、链霉素)。

　　(4)其它：70%酒精 、无菌生理盐水 、平皿等。

　　2. 方法

　　(1)临床标本用70%酒精浸泡数分钟，杀死表面杂菌，以无菌生理盐水洗涤。

　　(2)将处理过的临床标本和实验室保存菌种分别接种于2~3只含有青、链霉素的沙保弱氏葡萄糖斜面培养基上，对临床标本直接将数根毛发或数块皮屑接种。真菌菌种则用灭菌接种环按斜面培养基接种法接种。

　　(3)置22~28℃培养2~3w或37℃培养箱中培养3~7d。

　　(4)一周观察1~2次，临床标本连续培养3w无菌落生长者可报告阴性，如长出菌落，应逐日观察菌落形态及颜色变化。

　　3. 结果观察

　　真菌的菌落从形态上可分三大类：酵母菌落、酵母样(型)菌落及丝状菌落。

　　(1)酵母菌落(观察新生隐球菌培养物)：菌落为圆形、较白色，边缘整齐表面光滑、湿润，假菌丝不伸入到培养基内，和表皮葡萄球菌菌落相似。

　　(2)酵母样(型)菌落(观察白假丝酵母菌)：表面和酵母菌落相似，但生成的假菌丝伸入培养基内。

　　(3)丝状菌落：观察各种皮肤丝状菌斜面培养物,菌落表面大都有气生菌丝,肉眼观察呈绒毛状、粉状、棉花样等，故称丝状菌落，色泽多种多样，红色毛菌呈紫红色，铁锈色毛菌呈铁锈色或棕色等，菌落底层有营养菌丝伸入培养基内。