兽药残留检测技术--样品前处理技术

　　内容摘要：样品的前处理包括提取、净化、浓缩和衍生化。设计样品处理方法必须考虑到待测组分的理化性质、存在状态、样品基质的化学组成、可能的干扰物质类型、处理方法对药物稳定性的影响和采用的测定方法。

　　动物性食品中兽药残留的特点是样品中残留物水平很低，样品基质复杂，干扰物质多，不易从样品中分离、纯化残留物。因此，兽药残留分析是针对复杂生物样品基质中痕量组分的分析技术。样品的分离纯化是兽药残留分析中最费时和劳动强度最大的步骤。传统的样品制备技术如液一液分配等仍在广泛使用，同时一些新的样品分离纯化技术也不断被引入到兽药残留分析中。免疫亲和色谱技术、分子印迹技术、基质固相分散技术、超临界流体萃取(sFE)等是残留分析中有效的分离纯化方法，目前是兽药残留分析领域中的研究热点。

　　样品的前处理包括提取、净化、浓缩和衍生化。设计样品处理方法必须考虑到待测组分的理化性质、存在状态、样品基质的化学组成、可能的干扰物质类型、处理方法对药物稳定性的影响和采用的测定方法。经典的样品前处理方法如索氏提取、液液萃取，由于进行多次重复操作，往往需要花费大量时间，同时涉及使用会造成环境污染的大量有机溶剂，由于被测目标物质的浓度越来越低，稳定性随时空变化，给分析检测带来了一定困难。近年来发展较快的方法主要有超声辅助提取 (Sonication—assist，ed Extraction，SAE)法、固相萃取(solid Phase Extraction，SPE)法、基质固相分散技术(Ma—trix solid—pllasc-dispersion，MSPD)、超临界流体萃取(Supercritical F1uid Ex—traction，SFE)等。

　　1.超声辅助提取法

　　该技术在1 96 7年由Johnson等提出SAE提取的作用有两方面：通过空化作用使分子运动加快;同时将超声波的能量传递给样品，使组分脱附和溶解加快。SAE操作简单、一次可以同时提取多个样品，其提取时间短、速度快、提取效率高，因此广泛应用于化学化工，医疗，药物残留分析等领域中。

　　2.固相萃取法

　　固相萃取(Solid Phase Extracti‘on，sPE)是一种应用较早的样品处理技术，由液固萃取和柱液相色谱技术相结合发展而来的[z～·引。与传统的液液萃取法(Liquid Liquid Extracl：ion，LLE)相比，SPE具有回收率高、分离效果好、操作简单、省时省力等优点[引。由于SPE是一种柱色谱分离过程，分离机理、固定相和淋洗溶剂的选择等与高效液相色谱类似，目前用于HPLC的填料几乎均可用于SPE。但sPE的填料一般专为样品处理设计，粒径大于HPLC填料，其柱效远低于HPLC色谱柱。SPE柱的种类有正相、反相、离子交换柱和吸附树脂柱。正相SPE柱的填料主要为硅胶、氧化铝、硅镁吸附剂等;反相柱填料主要为c-8、氰基键合柱(cN)。sPE操作步骤包括固定相活化、样品上柱、洗涤和洗脱四个部分，其中加到萃取柱上的样品量取决于萃取柱的尺寸、类型、待测组分的保留性质以及待测组分于基质组分的浓度等因素。

　　通过固相萃取净化与气质联用仪测定动物组织中盐酸克伦特罗的残留量，对盐酸克伦特罗在c18和离子交换固相萃取柱上的保留行为进行了研究，发现不同浓度盐酸克伦特罗的固相萃取回收率在75%～95%之间。熊芳[s]等利用SPE净化样品，用HPLC测定了动物肝脏中四种磺胺类药物的残留量。采用 SPE前处理技术，建立了HPLC法快速测定鸡肉、鱼、虾中呋喃它酮(furaItadon)、呋哺唑酮(furazolidonum)呋喃西林 (furacilin)、呋喃妥因(titrofurantonic)四种药物残留量，四种药物在鸡肉、鱼、虾样品中的添加回收率为87%～102%。

　　3.基质固相分散技术

　　基质固相分散技术(Matrix Solid—Phase Dispersion，MSPD)是一种在SPE的基础上改进后的样品处理方法[14~22]。它是将样品(固态或液态)直接与适量反相键合硅胶一起混合研磨，使样品均匀分散于固定相颗粒的表面，制成半固态装柱，然后采用类似于SPE的操作进行洗脱。与SPE相比，基质固相分散技术的优点在于：它依靠机械剪切力、c-s键合相的去垢效应和巨大的表面积使样品结构破碎，并且在填料表面均匀分散，浓缩了传统的样品前处理中所需的样品匀化、组织细胞裂解、提取、净化等过程，避免了样品匀化、转溶、浓缩造成的待测物损失。张素霞‘¨’等以MSPD为基础，选择国内常用的9种磺胺类药物建立了多残留快速分析技术，并对MSPD样品处理过程和HPLC分离方法进行了探讨。Crescenzi["]等用MSPD技术提取净化牛肝中的克伦特罗，并用LC—MS检测。

　　4.超临界流体萃取

　　超临界流体萃取(Supercritical Fluid Extraction，SFE)技术是以超临界状态下的流体为溶剂，利用该状态下的流体所具有的高渗透能力和高溶解能力分离混合物的过程。超临界流体是温度与压力均在其临界点之上的流体，性质介于气体和液体之间，有与液体相接近的密度，与气体相接近的黏度及高的扩散系数，故具有很高的溶解能力及良好的流动、传递、渗透性能。超临界流体萃取与其他技术如溶剂萃取、蒸馏、常规柱色谱等相比具有速度快、效率高、选择性强、易于净化等特点。最常用的超临界流体为 C02，它具有无毒、无臭、化学惰性、不污染样品、易于提纯等优点E23,24]。随着十多年的发展，SFE已经在环境检测、医药卫生、食品检验等领域得到了广泛的应用。Jimenez采用离子对型SFE提取食品中的克伦特罗。当压力为38.3MPa，温度为80C时，萃取时间30min的回收率大于87%。