18O稳定同位素标记定量蛋白质组研究技术的建立与优化

摘　要　建立了18O稳定同位素标记方法,用于复杂体系蛋白质相对定量分析。对影响蛋白质标记稳定性的实验条件进行了比较和优化。结果表明,采用酶切后标记的方法,酶切肽段在胰酶催化下,在pH 5. 0 的K2HPO4 /KH2 PO4缓冲体系中, 37℃18O标记反应16 h,绝大部分肽段即可达到100%的标记效率。对多个16O /18O成对肽段峰强度的动态范围及定量准确度进行了考察。结果表明, 18O标记方法是一种简便、稳定、可靠的相对定量方法, 10倍动态范围内,标记率相对标准偏差在18. 4%以内, 16O /18O峰强度呈很好的线性关系。本实验考察了标记后的肽段在不同溶液体系中的稳定性,为复杂样品的预处理和预分离的溶液条件提供了依据。