枯草杆菌62磷酸葡萄糖酸脱氢酶的分离纯化及部分性质研究

摘要:采用DEAE2Sepharose 离子交换层析,Blue2Sepharose CL26B 特异结合层析和Sephadex G2200 凝胶过滤技术,对枯草芽孢杆菌中的62磷酸葡萄糖酸脱氢酶进行了分离纯化. 纯化倍数为112. 3 倍,比活为1. 46 U/ mg ,回收率为8. 2 %. 纯化酶液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检验为单一带. 测得全酶相对分子质量为107kD ,具有两个分子量相同的亚基,亚基相对分子质量为51kD. 最适pH 值为8. 0 ,最适温度为30 ℃,对热不稳定. 以62磷酸葡萄糖酸和NADP+ 为底物,其Km 值分别为Km1 ( NADP + ) = 19. 8μmol/ L 和Km2 ( 62GPA) = 22. 6 μmol/ L. 在5 mmol/ L～50 mmol/ L浓度范围内,Mg2 + ,Ca2 + 和Mn2 + 对酶有激活作用, Fe3 + 和Cu2 + 对酶有抑制作用, K+ ,Na + ,Cl - ,NO -3 , SO -4 对酶几乎没有影响. 用PMSF , TNBS ,NBS ,DTT 和BrAc 对酶进行修饰,实验结果表明,丝氨酸、苏氨酸、赖氨酸和组氨酸残基可能是该酶活性中心的功能基团.