牛肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链非胶原区1 的分离纯化及其在抗肾小球基底膜相关疾病中的应用

[摘　要] 目的:分离纯化抗肾小球基底膜( GBM) 抗体的特异性靶抗原,并评价其在抗GBM 抗体检测中的应用价值。方法:通过孔径不同的筛网从牛肾脏中提取牛肾小球,采用改良的40 g·L - 1去氧胆酸钠破坏肾小球细胞而获得GBM ,经胶原酶消化后收集可溶性牛GBM 粗抗原。在pH 7. 5 的条件下经Mono Q 阴离子交换层析柱分离纯化肾小球基底膜Ⅳ型胶原α链非胶原区1[α( Ⅳ) NC1 ] ,并经SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot 鉴定其纯度及活性。应用2 mg·L - 1纯化的牛α( Ⅳ) NC1 包被酶标板,建立牛α( Ⅳ) NC1 - EL ISA 方法检测血清中抗GBM 抗体,并与经典的以人GBM 可溶性蛋白为粗抗原的EL ISA 法进行对照研究。血清来自90 例已知抗人GBM 抗体阳性的患者、100 例正常人和50 例其他肾脏疾病患者。对两种方法进行相关分析并计算牛α( Ⅳ) NC1 - EL ISA 的敏感性、特异性。结果:纯化的牛α( Ⅳ) NC1 经SDS - 聚丙烯酰胺凝胶电泳表现为相对分子质量为25 ×103 和50 ×103的蛋白并可被抗GBM 抗体阳性血清所识别;应用牛α( Ⅳ) NC1 - EL ISA 法检测抗GBM 抗体的敏感性和特异性分别为100 %和98 % ,与人GBM 粗抗原- EL ISA 的相关性为0. 6 。结论:应用改良的去氧胆酸钠方法破坏肾小球内细胞并进一步经MonoQ 离子交换柱分离纯化牛α( Ⅳ) NC1 ,可以得到高纯度的特异性靶抗原;纯化的牛α( Ⅳ) NC1可以作为特异性抗原来检测人抗GBM 抗体。