流感病毒RNA 聚合酶的分离与纯化

[摘要] 　目的　建立分离、纯化流感病毒RNA 聚合酶PB1、PB2 和PA 3P 蛋白的有效方法,为进一步研究3P 蛋白的结构和功能奠定基础。方法　用甘油、CsCl1 及CsTFA 不同介质的密度梯度超速离心法进行分离,用SDS - PAGE 电泳及Western blot 法检测3P 蛋白,用尿素变性PAGE 检测vRNA。结果　用甘油密度梯度离心,可从病毒粒子中分离由NP、3P 和RNA 组成的RNP。将纯化的RNP 用CsCl 和甘油双组分不连续密度梯度离心,可形成NP 和3P - RNA两部分,使NP 与3P - RNA 分离。进一步将3P - RNA 在CsTFA - 甘油双组分不连续密度梯度介质中进行超速离心,可有效地将3P 与RNA 分离,获得较纯的3P 蛋白。3P 位于离心管的上半部分,而RNA 则位于离心管的近底端部分。结论　用甘油、CsCl - 甘油和CsTFA - 甘油分步超离心法可有效地从流感病毒粒子中纯化出高纯度的流感病毒RNA 聚合酶。