药物分析技术之DNA扩增检测技术的应用

在药物的分析和研究，以及控制药物质量等方面有着广泛应用的药物分析检测技术，可以采用物理、化学等方式对药物进行系统的分析，并结合现代化学、光谱、色谱等技术对药品进行研究。DNA扩增检测技是现代生物学重大发现之一，也是现代药物分析中快速检测技术之一。

作为人体生命的重要物质，核酸和蛋白的异常表达往往与癌症疾病息息相关，及早发现、诊断和治疗会有效降低癌症的发病率，因此迫切需要建立能检测痕量核酸和蛋白的高灵敏策略。核酸大分子分为两类：脱氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)，它们是生物的基本遗传物质。DNA、RNA(尤其miRNA)的表达水平与疾病的发生发展密切相关，如肿瘤的发生、病毒的感染等。

DNA扩增检测技术的应用主要是通过DNA片段的扩增识别，将传统需要较长时间才可以肉眼识别的过程，实现快速的分析得出结论。DNA扩增检测技术首先变现模板DNA，其次将引物与模板DNA进行复合。然后延伸引物，并通过引物的作用，形成半保留DNA。DNA扩增检测技术并不需要将样品与病毒进行分离，大大简化了模板的获得流程，其操作模式也较为简单。DNA扩增检测技术是一种重要药物分析检测技术之一，聚合酶链式反应(PCR)检测技术是DNA扩增检测技术主要应用平台。

PCR的最大特点，是能将微量的DNA大幅增加。聚合酶链式反应技术用于药物分析检测，通过对药物的序列进行扩增，可以进行药物的鉴别研究。如有研究者通过对市面大量流通的非中国药典收载紫草基原的所谓紫草进行分析，建立紫草正品与非中国药典品的鉴别方法^[1]。研究者通过聚合酶链式反应对紫草的ITS2序列进行扩增，通过与Gen Bank数据库进行Blast比对，确定非中国药典品的科属；利用距离法和建树法比较非中国药典品与软紫草属、滇紫草属、紫草属的亲缘关系；利用限制性内切酶AluⅠ酶切PCR产物，将酶切产物经琼脂糖凝胶电泳检测后紫外成像。结果发现利用聚合酶链式反应限制性长度片段多态性法可鉴别紫草正品与非中国药典品。

药物分析不仅是对化学成分、中药性质的静态研究，还是对生物体内的代谢以及反映动态进行分析的过程，药物分析是以物质科学为基础与生命科学相结合发展，演变成对药物活性的相关分析。美迪西药物分析提供全方位的药物分析服务，包括方法开发和方法验证，分析测试与放行，稳定性研究，大规模分离和CMC申报文件服务。

聚合酶链式反应技术还能够对基因鉴定起到一定的积极作用，通过PCR检测技术的应用，逐一诊断人体内的DNA，有助于尽早判定缺陷DNA，能够及时预知疾病，有助于该疾病的预防以及治疗方案制定。如有研究者建立了检测鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1(BRAF)基因V600E突变的荧光聚合酶链式反应方法，为黑色素瘤的药物靶向治疗提供新的基因检测方法^[2]。方法是根据BRAF基因序列V600E位点区域设计特异性的引物和探针，建立该检测方法。检测BRAF基因V600E突变的黑色素瘤临床样本、BRAF基因V600E突变质粒和正常临床样本，评价方法的准确性、灵敏度和特异性。

结果发现BRAF基因V600E突变的黑色素瘤临床样本在V600E检测体系中具有特异性的扩增；检测灵敏度约为101拷贝/反应；正常临床样本在V600E检测体系中没有特异性的扩增，均是V600E突变阴性。该研究建立的方法可以用于检测黑色素瘤临床样本中的BRAF基因V600E突变。

在医疗事业发展的过程中，该技术的应用范围极广，PCR检测技术还能够对疾病诊断起到重要的作用，可以快速分离并检测出DNA片段中所含有的细菌以及病毒等常见病原体，能够对一些病毒性流感以及肿瘤等疾病起到一定的病情判断作用。

[1]基于ITS2序列的紫草PCR-RFLP鉴别研究[J].

[2]BRAF基因V600E突变检测的荧光PCR方法的建立[J].