DNA损伤检测技术,你知道多少?

上一篇 / 下一篇  2020-01-07 18:16:14/ 个人分类:试剂盒

DNA是携带生物体遗传信息的重要分子,它的完整性对细胞存活至关重要。然而,在生命活动中,DNA时刻遭受着内源性(氧化自由基、复制叉崩塌等)或外源性(电离辐射、烷化剂等)刺激,DNA损伤不可避免。

检测DNA损伤的方法有很多,根据其原理大致可以分为3类: 基于损伤DNA理化性质的改变检测DNA损伤、基于分子杂交检测DNA损伤以及基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤。前两种方法是基于荧光标记直接观测DNA的损伤情况,而基于DNA损伤后形成的产物检测DNA损伤是通过标记物的检测间接反映DNA的损伤程度。

※ 基于DNA损伤后形成产物进行检测

DNA损伤过程中可形成某些特定的损伤产物,可通过检测损伤产物(磷酸化H2AX、8-OHdG等)来评估DNA损伤。也可标记损伤DNA,如末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿苷三磷酸标记(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL),通过标记物的检测间接反映DNA的损伤程度。

1.双链断裂标志物磷酸化H2AX检测法 H2AX是组蛋白H2A家族成员之一,包含一个进化保守区域SQ位于真核细胞的C末端,分子量为14KD,139位有个丝氨酸残基,在细胞发生DNA双链断裂后的数分钟内,将会被ATM,ATR和PRKDC磷酸化,形成γH2AX,进而迅速招募DNA修复蛋白和凋亡蛋白到损伤部位,每个双链的断裂区会有成百上千的γ-H2AX,然后在1h左右数量和密度达到峰值。由于γH2AX的出现与DNA双链断裂紧密关联,是目前国内外研究细胞DNA双链断裂应激反应的热点之一,同时也可以作为DNA双链断裂的标志物。

由于与DNA双链断裂紧密相关,γH2AX可以作为双链修复的标志物 1.原位DNA损伤分析试剂盒(96次分析),P-6001-096 2.H2AFX 多克隆抗体,PAB8764 3.8-OHdG DNA损伤定量直接分析试剂盒(比色法)(48次分析),P-6003-48

DNA断片标记法 原位末端标记法(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)是一种检测凋亡细胞DNA链断裂片段的方法。细胞凋亡发生时,内源性核酸内切酶将DNA降解成片段,在脱氧核苷酸末端转移酶的作用下,底物dUTP 或BrDU(无或有荧光标记)可连接到DNA断片的3-OH末端,采用荧光显微镜或流式细胞仪对标记物进行分析,实现在单细胞水平检测凋亡细胞的DNA碎片

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http://www.bio-review.com/dna-damage-assay-kit/













TAG: dna损伤检测

 

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