扒一扒什么是假病毒体外中和试验？

在进行生物技术药物研发时，使用免疫原性检测技术快速、可靠地预测生物技术药物在体内的免疫原性对于开发新的蛋白治疗药物如疫苗具有非常重要的意义。进行抗病毒疫苗研发时，判断某种疫苗是否具有免疫效果，体现在免疫机体后能否产生足够的中和抗体。对于一些致病性和传染性很强的病毒，操作活菌面临着危险性高、周期长、实验条件要求比较苛刻和对实验室要求严格和等情况。此时，假病毒技术是一种非常有效的研究手段。

在对病毒进行研究的过程中，准确评价病毒感染后体内中和抗体反应不仅对确诊具有重要价值，而且对研究免疫保护相关性较为重要。中和抗体也是病毒消除、疾病预后以及疫苗效果评价的重要指标。关于中和抗体的解释，网上有资料报道中和抗体是由适应性免疫应答细胞分泌的一种可溶性蛋白, 能够与病原体表面的抗原结合。病毒入侵人体后，免疫细胞把中和抗体分泌到血液中，后者与血液里的病毒颗粒结合，从而阻止病毒黏附靶细胞受体，这样病毒就被「中和」掉了。

由于 HPV 难以在体外大量培养,目前 HPV 中和抗体检测方法主要是依赖于假病毒的检测。世界卫生组织(WHO)在其 HPV 疫苗指南中指出中和抗体是评价 HPV 预防性疫苗免疫保护效果的金标准。与传统的免疫原性检测方法ELISA相比，假病毒体外中和试验和ELISA方法的检测结果具有相关性。如有研究者比较了两种重组人乳头瘤状病毒52型(HPV52)免疫原性检测方法的相关性，分别采用假病毒体外中和试验(pseudovirus based neutralization assay,PBNA)及酶联免疫吸试验(ELISA)检测免疫后小鼠血清中HPV52型中和抗体滴度,比较两种检测方法的相关性^[1]。研究结果发现采用PBNA法检测的HPV52型中和抗体滴度与ELISA法检测的抗体滴度具有较高的相关性。

抗体滴度用来衡量某种抗体（antibody)识别特定抗原决定部位(epitope)所需要的最低浓度（也即最大稀释度)。一般表示为仍能产生阳性结果的最大稀释度。通常通过ELISA方法来检测抗体滴度。在HPV预防性疫苗临床试验中用于抗体滴度检测的方法主要有直接ELISA法、单表位竞争ELISA法和假病毒法等。直接ELISA法具有检测方法简便、适于进行高通量检测的优点。美迪西提供免疫原性检测服务，主要使用小鼠、大鼠、豚鼠、兔、犬、非人灵长类动物做免疫原性毒性试验。

假病毒技术是近几年兴起的一种研究基础病毒学的新型手段，假病毒是指一种反转录病毒，能够整合另外一种不同种类病毒的包膜糖蛋白，从而形成具有外源性病毒的包膜，而基因组保持着反转爿乏病毒本身基因组特性的病毒.目前国内外已经建立了多种假病毒体系，如HIV、SARS和HCV等，被广泛应用于研究病毒与宿主细胞的相互关系、鉴定病毒受体、测定患者体内中和抗体的效价等诸多方面. 假病毒技术被广泛应用于中和抗体效价的评价以及抗病毒药物的筛选中。

假病毒体外中和试验在疫苗研发中的应用有很多如有研究者通过构建SARS假病毒而建立一套完整的SARS体外中和试验检测体系,还有研究者对人乳头瘤病毒假病毒中和抗体检测方法在疫苗临床样本检测中的应用进行验证，发现HPV 假病毒中和抗体检测方法具有较好的特异性、准确性、精密度和耐用性,可以应用于 HPV 疫苗临床血清样本的免疫原性评价。也有研究者构建了H5N1 AIV假病毒，为评价血清的中和活性以及进一步筛选单克隆中和抗体搭建了高效、安全的基础平台。

然而假病毒法存在检测周期长，影响因素很多等问题，因此要将其应用于临床试验中需要对其进行充分的方法学验证，以保证检测结果的准确、可靠。

[1] 两种重组人乳头瘤病毒52型免疫原性检测方法相关性的比较[J].