人松弛素原样蛋白H2 在大肠杆菌中的表达、分离纯化及鉴定

摘要　利用聚合酶链式反应方法, 从含有人前松弛素原cDNA 基因的质粒pMAL p2X- hRLX H2 上得到人松弛素原H2 的编码基因, 亚克隆到温度诱导型原核表达载体pBV220 上, 转化大肠杆菌DH5α细胞。经42 ℃温度诱导, 获得了目的基因的高效表达。目的蛋白质以包含体的形式存在于大肠杆菌细胞中。菌体经过超声波破碎, 包含体裂解, 蛋白质的体外变性还原, 复性, Sephadex G275 凝胶过滤层析, 反相快速蛋白质液相层析等一系列分离纯化过程, 得到了高纯度的重组Met2人松弛素原样蛋白H2 , 得率约为2～3 mg/ L 。对纯化的目的蛋白质进行了SDS2PAGE 电泳纯度分析, 氨基酸组成分析, 通过基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法测得目的蛋白质的分子量为18 390. 4 (理论计算值为18 392. 3) 。