组织因子膜外区融合蛋白基因的表达及产物的分离纯化与活性分析

上一篇 / 下一篇  2008-11-03 21:18:10/ 个人分类:分离纯化

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摘要 为构建表达组织因子(TF) 膜外区的融合载体, 制备组织因子膜外区, 抽提人胎盘组织的总RNA , 通过RT 2PCR 法扩增出TF 的cDNA 克隆至pU C18 并测定全序列L 然后以此为模板, 再次PCR 扩增出TF 膜外区(so lub le TF, sTF) cDNA , 并将其插入到谷胱甘肽巯基转移酶融合表达载体pGEX 4T 21, 构建了tac 启动子控制下的GST 2sTF 融合蛋白的表达载体L表达的融合蛋白经亲和层析、凝血酶切得到纯化的sTFL表达产物经EL ISA 验证, 能特异性地与TF 抗体结合L重新脂化后, 该产物具有较大凝血活性L 以上说明采用融合蛋白表达系统可以大量制备组织因子膜外区,为研制国产重组凝血活酶试剂和研究sTF 的结构和功能创造条件L



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TAG: 分离纯化基因表达活性组织因子融合蛋白

 

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