核酸检测工具怎么选？dsDNA核酸荧光定量试剂来啦

关于核酸检测，方法还是挺多的，比如常用的分光光度法，和荧光染料法。

一、分光光度法

此法不具有选择性，无法区分DNA、RNA或蛋白质。检测数值J易受到其他污染物(如游离核苷酸、盐和有机化合物)和碱基组成差异的影响。

二、荧光染料法

也是今天要重点介绍的，有哪些荧光染料，可以特异地与双链DNA、单链DNA、RNA相结合，并在特定波长光源的激发下，发出荧光，并且不会检测到样本中可能存在的其他杂质分子，荧光强度与样品中的靶分子浓度相对应呢？

一起来看看吧：

首先，是 DNA和RNA定量试剂

Helixyte Green dsDNA定量试剂（17597）和StrandBrite Green RNA定量试剂（17611）分别对双链DNA和单链RNA进行了优化。它们对核酸有很高的亲和力，对结合核酸有J大的荧光增强作用，使得在几分钟内直接检测复杂溶液中微量核酸成为可能，而且一般不会受到其他生物分子的干扰。

小牛胸腺DNA中使用Helixyte 绿色和PicoGreen进行DNA定量。由图看出Helixyte 绿色和PicoGreen 具有几乎相同的性能。

Helixyte Green是一种出色的核酸定量试剂，与dsDNA结合后可显著增强荧光。其优势如下：

高灵敏度：Helixyte Green和StrandBrite Green的灵敏度比UV吸收率测定法高10,000倍

选择性高：与紫外吸收的测量不同，这些检测不受蛋白质，游离核苷酸或非常短的寡核苷酸的影响，从而使完整的寡核苷酸和核酸的定量在复杂混合物（例如血清或全血）中更加准确。

操作简单：这些检测方法非常简单，不需要分离步骤，因此非常适合自动化，高通量筛选

检范围广：对于Helixyte Green的检测，定量在四个数量级内都是准确的。基于StrandBrite 的荧光检测在三个数量级上都是准确的。

1、dsDNA定量

Hoechst 33258,超级纯，#AAT-17520

Hoechst染料是一类在显微观察中标记DNA的荧光染料。因为这类荧光染料能标记DNA，所以它们也经常用于细胞核和线粒体的显像观察。这类染料中两个相关的染料Hoechst 33258和Hoechst 33342经常使用。这两种染料都在紫外光下350nm处被激发，都在461nm处zui大发射光附近发射蓝/青色荧光。Hoechst染料可以用于活细胞或者固定化细胞，并且经常用来代替其它核酸染料如DAPI。这两种染料关键的不同点在于，与DAPI相比，Hoechst 33342加有乙基，这使它具有更强的亲脂性，因此能更好的透过完整的细胞膜。在一些实验中，Hoechst 33258的渗透性明显比Hoechst 33342要弱些。这些染料也可以用来检测样品中的DNA含量，通过绘制发射光强度与DNA含量的标准曲线。

2.RNA定量

StrandBrite 绿色RNA定量试剂,200X DMSO 溶液，#AAT-17610

检测和定量小量RNA在各种分子生物学应用中尤其重要，比如定量体外RNA转录及测量RNA浓度在准备进行Northern印记杂交，S1p核酸酶分析，RNA酶保护分析，cDNA文库制备，逆转录PCR及DD-PCR。zui常用的是测定核酸浓度技术，在260nm处测定吸光度。基于吸光度的方法主要的缺点是来自蛋白、游离核苷酸及其他紫外线吸收化合物的干扰。利用灵敏的带荧光的核酸染色剂可减轻这种干扰状况。StrandBrite RNA定量试剂是一种可在溶液中对RNA进行定量检测的超灵敏的荧光核酸染色剂。StrandBriteRNA定量试剂可检测出浓度低至 5 ng/mL的RNA通过荧光酶标仪或荧光光度计。

关于核酸定量，以及荧光探针今天就介绍到这里啦，下期见哦

http://www.amyjet.com/featured/nucleic-acid-quantification.shtml