如何使用流式,检测活化的血样中T淋巴细胞的增殖反应?

上一篇 / 下一篇  2021-03-05 15:44:16/ 个人分类:科研发现

T淋巴细胞特异性识别抗原后,可被双活化信号刺激后,通过信号转导启动有关基因转录,进而发生增殖,这是淋巴细胞的基本功能,反映了其对抗原的识别和发生免疫应答的能力。

 

流式细胞术,是zui常用的检测T淋巴细胞活化增殖的方法。接下来一起看看,如何使用流式,简单快捷的检测活化的血样中T淋巴细胞的增殖反应?

 

作为专业的流式抗体与解决方案,艾美捷科技推荐流式科研与诊断方案领导者EXBio的T淋巴细胞增殖反应检测试剂盒(T-cell BlastoFlowEx Kit)、

 

T淋巴细胞增殖反应检测试剂盒 #ED7642 旨在测量活化的全血样本中T淋巴细胞的增殖反应。 该试剂盒使用抗CD3和抗Ki67抗体混合物检测增殖的淋巴细胞。

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T淋巴细胞增殖反应检测试剂盒实验流程:

1.从培养箱中取出试管,取下并丢弃管盖。每管中加入25 ul EDTA溶液,混合。

2.在37℃下孵育10分钟。

3.加入2mlPBS,混合。400g离心细胞5分钟,移除上清液。

4.轻轻摇动管子扰乱沉淀。加入2ml的稀释固定和裂解溶液,混合。室温下孵育10分钟。

5.400g离心细胞5分钟,移除上清液。

6.加入0.5ml稀释的破膜溶液,混合。室温下孵育10分钟。

7.加入2mlPBS400g离心细胞5分钟,移除上清液。

8.加入50 ulCD3/Ki-67 PE抗体预混液,混匀,室温下孵育至少30分钟。

9.加入2ml PBS400g离心细胞5分钟,移除上清液。

10.用0.1-0.3ml1%甲醛PBS溶液或者稀释的固定和裂解液(1份固定裂解液液+9PBS的缓冲液)重悬细胞。在2-8℃下暗室条件下储存处理后的样品,直到分析。

 

T淋巴细胞增殖反应检测试剂盒结果展示:

 

1.用巨细胞病毒 -IE-1蛋白抗原肽体外刺激巨细胞病毒阳性供体全血

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2.用巨细胞病毒 pp65抗原肽体外刺激巨细胞病毒阳性供体全血

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3.全血在植物血凝素(PHA)管(货号:ED7634)中刺激,用T细胞BlastoFlowEx试剂盒处理并在流式细胞仪中进行分析。 CD3 + /单细胞的目标亚群显示为PE荧光的直方图。根据刺激阴性对照管(货号:ED7637)确定Ki-67阴性峰和Ki-67阳性峰之间的区分线。

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文章来源:艾美捷科技


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