病毒滴度——慢病毒滴度检测方案来啦

病毒滴度即病毒的毒力，或毒价，衡量病毒滴度的单位有zui小致死量（MLD）、zui小感染量（MID）和半数致死量（LD50），其中以LD50zui常用。它是指在一定时间内能使半数试验动物致死的病毒量。

前面我们介绍过慢病毒包装，这里重点介绍一下病毒滴度，那么什么是慢病毒滴度？慢病毒滴度是用于评估转导一定数量靶细胞所需要的病毒数量，即每升溶液中含有的病毒数量。转导单位(TU)即能够感染并整合到细胞内的病毒载体基因组。

病毒包装后的效力如何，如何定量，也是必须要检测的，专业术语称为：病毒滴度的测定。下面我们就来聊下几种常见的慢病毒载体滴度的检测方法。

一、病毒滴度检测ELISA法

p24蛋白是慢病毒外壳中含量zui大的标志性蛋白。p24 ELISA法测量病毒上清液中p24衣壳蛋白的量，然后将p24的含量水平与病毒滴度关联起来。Cell Biolabs提供的基于慢病毒p24蛋白的ELISA分析分两种，一种称为传统的p24蛋白ELISA检测（Quantitation Kit (Traditional HIV p24 ELISA)），能检测所有p24蛋白，从而实现对病毒滴度的定量，可检测1 ng/mL HIV p24蛋白，zui后分光光度计读取数据。

但是由于这种传统的p24 ELISA 法能检测所有p24蛋白，所以病毒滴度会偏高。同时Cell Biolabs的新Lentivirus Titer Kit(Lentivirus-Associated HIV p24)能分离出包装细胞产生的游离p24蛋白，只检测病毒颗粒表面的p24，因此实验数据更真实准确，可检测1 ng /mL HIV p24蛋白，zui后分光光度计读取数据。

1、传统的p24 ELISA法

QuickTiter 慢病毒滴度检测试剂盒（p24蛋白ELISA检测）：慢病毒载体的HIV-1 p24核心蛋白的定量是一种确定慢病毒物理滴度的有效且广为人知的方法。QuickTiter慢病毒定量试剂盒提供了一种方便的p24抗原定量方法。

2、新的p24 ELISA法

QuickTiter 慢病毒滴度检测试剂盒（慢病毒相关p24蛋白ELISA检测）：可zui大程度地减少此问题。一项专有技术可在运行测定的ELISA部分之前，将慢病毒与溶液中的游离p24分离。

二、病毒滴度检测Real-time PCR法

利用基于SYBRGreen的荧光定量PCR方法，PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。利用荧光信号的变化实时检测PCR扩增反应中每一个循环扩增产物量的变化，通过Ct值和标准曲线的分析对起始模板进行定量分析，根据相应公式计算慢病毒滴度。

Lenti-Pac™慢病毒滴度检测试剂盒（LT005）系列为简便、快速检测慢病毒颗粒的滴度而设计。试剂盒包含从RNA抽提到qRT- PCR检测过程的全套试剂，样品经过RNA抽提、DNase消化、反转录、qRT-PCR步骤即可确定慢病毒滴度。

特色：

能够判断慢病毒是否包装成功；

准确测定病毒拷贝数，以确保细胞转导和基因表达的效率；

提供滴度检测过程从病毒的RNA提取到qPCR检测所需要的试剂。

文章来源：https://www.amyjet.com/featured/elisaqpcr.shtml

热门文章：https://www.amyjet.com/merchants/Abnova-join.html