比色法葡萄糖摄取试剂盒方案，及2-NBDG摄取原理

葡萄糖是大多数生物体中能量供应的主要来源，目前的研究显示，葡萄糖摄取异常跟多种疾病相关，例如在许多癌症细胞中, 表现有葡萄糖摄取的上调, 从而表现出很高的有氧糖酵解比率；胰岛素耐受细胞在遇到胰岛素刺激时, 会出现葡萄糖摄入减弱。因此葡萄糖摄取的检测成为许多细胞代谢相关疾病中的一个重要的指标。

通过测量组织和细胞中葡萄糖类似物2-脱氧葡萄糖（2-DG）的摄取已被广泛认为是一种测定葡萄糖摄取的可靠方法，可用来评估萄糖的摄取量以及研究葡萄糖代谢的调节和胰岛素抵抗的机制。通常我们是通过使用同位素氚或C14标记的非代谢型的2-DG来检测2-DG的摄入量。然而，同位素标记探针的使用较为昂贵的，并且检测时需要繁琐的特殊处理程序。

葡萄糖摄取分析解决方案如下：

AAT 的Screen Quest™比色法葡萄糖摄取分析试剂盒可采取非放射性分析分析的方法对组织或培养细胞进行葡萄糖摄取分析。

在检测过程中，2-DG被葡萄糖转运蛋白吸收，并代谢成2-DG-6-磷酸（2-DG6P），不能代谢的2-DG6P在细胞中积累，积累的量与细胞的葡萄糖摄取成正比，累积的2-DG6P被酶促氧化并产生NADPH，然后通过显色NADPH探针特异性检测NADPH，通过酶标仪读取570nm-610nm的OD值信号即可反应2-DG的摄取情况。

检测结果展示：

在分化的3T3-L1脂肪细胞和3T3-L1成纤维细胞中对2DG摄取进行检测。使用SpectraMax（Molecular Devices）微孔板读板器，在黑孔/透明底细胞培养Poly-D赖氨酸板子中，使用Screen Quest™比色法葡萄糖摄取检测试剂盒进行检测。

A：阴性对照，无胰岛素，无2-DG处理.

B：在无胰岛素的情况下2DG摄取.

C：在1mM胰岛素存在下2DG摄取.

D：在1mM胰岛素和200 mM促视黄素存在下2DG摄取.

E：在1mM胰岛素和5mM D-葡萄糖存在下2DG摄取.

比色法葡萄糖摄取试剂盒，还有2-NBDG葡萄糖摄取检测试剂盒，2-NBDG是一种荧光标记的葡萄糖示踪剂，2-NBDG通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白（GLUT）转运到细胞中。一旦2-NBDG被细胞摄取，它就在C-6位置发生磷酸化，得到2-NBDG-6-磷酸，它很好地保留在细胞内。与其他葡萄糖示踪剂（例如2-DG或FDG）相比，2-NBDG可实现在单细胞水平上具有高时间和空间分辨率的2-NBDG的原位测量。（适用于荧光显微镜和流式细胞仪检测）

细胞中2-NBDG摄取的测定原理: 一旦2-NBDG被细胞吸收，它会在C-6位置进行磷酸化，生成2-NBDG-6-磷酸盐，该磷酸盐会很好地保留在细胞内, 荧光强度与细胞葡萄糖摄取活性成正比。

文章来源：https://www.amyjet.com/featured/2-nbdg.shtml