N- 端加flag 标签增加P21Cip1/WAF1蛋白质稳定性

【摘要】背景与目的: 已知细胞分裂周期抑制因子P21 通过蛋白酶体通路降解,其氨基端的泛素化可能参与了这一过程。Flag 为一蛋白标签,常用于标记重组蛋白质,以便对靶蛋白进行生物学功能分析。本文旨在研究N- 端加flag 对P21 蛋白质稳定性的影响。材料与方法: 建立稳定表达外源flag-p21 蛋白质的NIH3T3 细胞株,应用蛋白印迹法(WB) 检测NIH3T3 细胞表达的flag-p21 ,并比较其与内源P21 蛋白质半衰期的差异;确定阻断蛋白酶体水解通路对其降解过程的影响。结果: NIH3T3 细胞表达的内源P21 蛋白质半衰期约30 min , 而同一细胞表达的flag-p21 融合蛋白半衰期则明显延长; 用抑制剂MG-132 阻断蛋白酶体水解通路后, P21 蛋白质的量明显增加,但同一细胞内表达的flag-p21 量却无明显改变。结论: N- 端加flag 标签可增加P21 蛋白质的稳定性。在对P21 蛋白质的生物学功能进行研究时,应考虑N- 端加flag 对P21 泛素化- 蛋白酶体依赖的降解过程的影响。