附参考资料丨PsbA丨D1 protein of PSII研究

由于PsbA（D1）蛋白质的生物学特性，在样品中可以观察到许多降解产物，并且在使用抗PsbA抗体时可以观察到这些降解产物，包括表观分子量为24kDa和16kDa的产物。D1降解是一组复杂的事件，观察到的产物可能受到提取程序和收获前细胞生理学的影响。D1和细胞色素b559之间可能发生交联，使蛋白质在凝胶中的位置升高。在蓝藻（PCC7942）中，通过将抗体与PsbA游离肽预孵育，三条不同的条带竞争，表明所有条带确实是PsbA及其前体或分解产物。还对菠菜和衣藻进行了竞争分析，确认了PsbA条带的身份。

抗PsbA抗体不会检测D2蛋白，因为用于产生PsbA抗体的肽与D2序列没有同源性。艾美捷 PsbA|D1 protein of PSII应用实例：

不同数量的PsbA蛋白质标准品（AS01 016S）250 fmol（1）、125 fmol（2）、62.5 fmol（3）、31.25 fmol（4）、15.625 fmol（5）和2µg总蛋白，从使用蛋白质提取缓冲液PEB（AS08 300）提取的Med4（6,7）中提取。样品用1X样品缓冲液（NuPAGE LDS样品缓冲液（Invitrogen））稀释，补充50 mM DTT，在70°C下加热5分钟，并在装载前保持在冰上。蛋白质样品在4-12%的Bolt Plus凝胶、LDS-PAGE上分离，并使用罐转移法在PVDF上吸附70分钟。在室温下搅拌2%封闭剂或5%非脂肪乳（溶解于20 mM Tris、137 mM氯化钠pH 7.6和0.1%（v/v）吐温-20（TBS-T）中）1小时后，立即封闭印迹。在室温下搅拌，以1:10000的稀释度（在封闭试剂中）在一级抗体中培养印迹1h。倾析抗体溶液，短暂冲洗印迹两次，然后在室温下搅拌，用TBS-T清洗1x15分钟和3x5分钟。将印迹在二级抗体（山羊抗兔IgG-辣根过氧化物酶结合物，推荐二级抗体AS09 602，Agrisera）中培养，在室温下搅拌，在封闭试剂中稀释至1:25 000，持续1h。按上述方法清洗污渍。根据制造商的说明，使用化学发光检测试剂开发印迹。使用CCD成像仪（VersaDoc MP 4000）和Quantity One软件（Bio-Rad）获得斑点图像。曝光时间为30秒。

参考资料：

Selected references Gu et al. (2021) A Lipid Bodies-Associated Galactosyl Hydrolase Is Involved in Triacylglycerol Biosynthesis and Galactolipid Turnover in the Unicellular Green Alga Chlamydomonas reinhardtii

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Khajuria et al. (2020). Photochemical Efficiency Is Negatively Correlated With the ? 9- Tetrahydrocannabinol Content in Cannabis Sativa L. Plant Physiol Biochem. 2020 Apr 8;151:589-600. doi: 10.1016/j.plaphy.2020.04.003.

Agrisera公司提供的植物领域的抗体涵盖拟南芥、莱茵衣藻、蓝藻、松柏类、硅藻、大豆、大麦、蒺藜苜蓿等等。艾美捷科技是Agrisera的中国代理商，为科研工作者提供优质的PsbA|D1 protein of PSII。