蛋白质通量化定位体系的建立及初步应用

［摘要］ 目的：对于蛋白质功能而言，蛋白质定位与蛋白质的表达和修饰等同等重要。传统的蛋白质定位一直沿用单个基因、逐个的研究方法，本实验拟建立一种通量蛋白质定位研究体系。方法：采用并优化了细胞微阵列技术，结合绿色荧光蛋白（LMN）标签、激光扫描共聚焦显微镜及反转染技术，用于大规模蛋白质定位研究。结果：初步建立的蛋白质定位微阵列包含"1O 个LMN 标记的5P;9 表达载体，分别编码"1O 个重要细胞信号传导通路的蛋白质，并与定位数据库中的已知结果进行了比对；对该系统的有效性进行了验证评价。结论：本定位系统可有效地用于通量化蛋白质定位研究，并可以发展用于蛋白质相互作用、泛素>蛋白酶体通路底物筛选等进一步的功能研究。