彗星分析功能及工具应用——Cell Biolabs详情介绍

由于环境因素和细胞内正常的新陈代谢过程，DNA损伤每天以每个细胞1000到100万个分子损伤的速度发生。虽然这只占人类基因组约60亿个碱基(30亿个碱基对)的一小部分，但关键基因的未修复损伤可能会阻碍细胞发挥其功能的能力，并显著增加癌症的可能性。

彗星实验（Comet assay）也被称为单细胞凝胶电泳实验（Single cell gel electrophoresis，SCGE），是一种超灵敏的单细胞水平上检测DNA损伤的技术，可以检测到1.657×10-15中0.1个DNA的断裂,甚至检出自然光照射体外淋巴细胞1h后引起的DNA损伤。在电泳场下，损伤的细胞DNA(包含碎片和链断裂)从完整的DNA中分离出来，在显微镜下形成典型的“彗星尾巴”形状。DNA损伤的程度通常是通过测量彗星尾巴来目测的，也可以使用图像分析软件来测量各种参数。

Cell Biolabs【彗星分析应用领域】：主要还是在细胞凋亡的研究，肿瘤/癌症研究，毒理学研究，环境污染监测，临床诊断与治疗监测。

接下来，艾美捷 Cell Biolabs会给大家分享一下彗星分析实验（Comet assay）怎么做？

步：Cell Biolabs彗星分析试剂盒不可少（可根据实验用量，选择不同的规格：）

最常用：Comet Assay Kits, 3-Well (3孔玻片)

高通量筛选：Comet Assay Kits, 96-Well（96孔玻片）

艾美捷 Cell Biolabs丨Comet Assay kit彗星分析试剂盒内提供了彗星分析所需的所有必需试剂，包括裂解液、彗星分析低熔点凝胶、DNA荧光染料、彗星分析玻片以及其它试剂。

第二步：彗星分析电泳模式选择：

电泳模式 检测类型 电泳时间 说明

TBE电泳（中性电泳）——检测单链和双链DNA的断裂——推荐10-15 mins——分析细胞凋亡的shou选方法，可使用尾巴长度而非尾矩进行数据分析。

碱性电泳——检测单链和双链DNA的断裂，AP位点损伤在内的所有DNA 损伤——推荐15-30mins——灵敏度zui高！

 * 实验过程中的各类缓冲液都需要4℃预冷。

关于电泳电压：以上2种电泳模式，均推荐参考实验室电泳槽两J间的举例，按照1V/cm的标准设置电压。举例，如果电泳槽两J举例是35cm，那么你需要使用35V的电压来执行电泳。

实验环境：为避免紫外线对细胞样品造成额外损害，请在弱光条件下进行。

第三步：彗星分析的典型结果样式

如上图，左侧是健康的Jurkat细胞（未处理）；右侧是使用20 uM Etoposide（依托泊苷）处理4小时的Jurkat细胞。【电泳条件：碱性电泳，15mins】

第四步：彗星分析结果计算

通过测量细胞核遗传物质（“彗头”）与产生的“尾巴”之间的位移，可以量化DNA损伤。 尾矩（Tail Moment）和尾巴DNA％（Tail DNA% ）是分析彗星分析结果的两个最常见的参数。 每个样品至少应分析50 -100个细胞。考虑到遗传物质的迁移以及尾巴中DNA的相对数量，通常建议使用尾矩作为评估DNA损伤的指标。

Cell Biolabs 配套彗星实验结果分析软件：

软件名称               说明

OpenComet 免费；是Image J软件的一款彗星分析插件

CaspLab （CASP） 免费；独立软件

Comet Assay IV 付费软件；可试用1周

艾美捷科技是Cell Biolabs的中国代理商，为科研工作者提供优质的彗星分析试剂盒。