急性淋巴细胞白血病白细胞磷酸化蛋白质分析方法的建立及初步分析

摘要 目的: 在建立白细胞磷酸化蛋白质分离分析方法的基础上对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行初步分析。方法: 选择2005- 01/2006- 03 于泸州医学院附属医院血液内科初诊住院的白血病患者10 例, 20～40 岁, 均经MICM 分类法确诊为急性淋巴细胞性白血病, 无合并严重感染, 心、肺、肾、肝等重要脏器疾患。健康自愿者为泸州医学院学生10 名, 23～32岁。分离健康自愿者与急性淋巴细胞性白血病患者新鲜外周血白细胞, 并均随机分为刺激组、抑制剂组、对照组。刺激组加入表皮生长因子(40 μg/L); 抑制剂组加入细胞外信号调节激酶特异性抑止剂UO126 ( 10 μg/L) 和表皮生长因子( 40 μg/L) ; 对照组加入等量的培养基, 用Bradford 法测定细胞蛋白质含量, BDTM Phophoprotein Enrichment Kit 分离富集白细胞磷酸化蛋白质, SDS-PAGE 分离磷酸化蛋白质, 银染法染色, 采用Scion Image 软件分析电泳结果。结果: 10 例急性淋巴细胞白血病患者及10 名正常健康志愿者均进入结果分析。①电泳图谱显示每条泳道中蛋白质条带清晰,其相对分子量主要介于26 000～36 000 Da 以及47 000～65 000 Da 之间。A、D 蛋白质谱带在健康自愿者中的表达较急性淋巴细胞性白血病患者增强; B 蛋白质谱带在急性淋巴细胞性白血病患者中表达较健康自愿者增强; D、E 蛋白质谱带分别在健康自愿者、急性淋巴细胞性白血病患者刺激组的表达明显较抑制剂组增强。②在使用表皮生长因子刺激后, E 蛋白质谱带的灰度值降低, 其磷酸化水平明显增高; UO126 抑制后, 其磷酸化水平降低。结论: 采用本实验建立的亲和层析富集磷酸化蛋白质、SDS-PAGE 分离、专业软件分析等方法对急性淋巴细胞白血病白细胞细胞外信号调节激酶相关磷酸化蛋白质进行动态的分析, 其方法较简便、结果可信, 可为细胞信息传递磷酸化蛋白质组的研究奠定了基础。