建立并优化胃溃疡复发大鼠蛋白质组分析的双向凝胶电泳技术

摘要 目的: 建立并优化白细胞介素1β致大鼠乙酸性胃溃疡复发模型大鼠蛋白质组分析所需的双向凝胶电泳技术。方法: 实验于2005- 04/2006- 02 在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室、卫生部肿瘤蛋白质组学重点实验室完成。①选用成年SD 大鼠60 只, 雌雄不拘。按随机数字表法分为2 组: 对照组、模型组, 每组30 只。采用乙酸复制胃溃疡动物模型及白细胞介素1β复制胃溃疡复发动物模型, 正常对照组施予相同的饮食方案。②两组大鼠于复发模型建立成功后24 h 禁食,48 h 后处死, 收集胃组织, 在组织样品离体后立即以冰盐水冲洗以去除组织液和血细胞, 并于30 min 内入液氮速冻, 采用化学和高速机械法进行胃组织裂解。采用Amersham Bios ciences 公司专门针对蛋白质组学研究中的蛋白质抽提方法设计的2DQuant Kit 定量试剂盒, 从而实现准确的蛋白质定量。为了尽量可能多分离蛋白质, 选择pH 值范围( pH 3~10) 的固相线性24 cm 干胶条和125 g/L 的均匀SDS 聚丙烯酰胺凝胶, 采用初始电压为2.5 W/ 胶电泳30 min, 然后以17 W/ 胶恒功率电泳, 直至溴酚蓝指示线到达凝胶底边处停止电泳。结果: 以固相pH 梯度- IPG 胶条(pH 3～10)进行第一向等电聚焦,以SDS 均一胶(12.5%)的垂直电泳为第二向,成功地得到了两组大鼠胃组织斑点分布均匀、数目较多的双向凝胶电泳图谱。结论: 通过对蛋白质双向凝胶电泳的建立及技术的优化, 获得了适合于研究胃溃疡复发蛋白质组差异表达。