快速开发反相固相萃取的方法的建议
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下一篇 2013-01-07 16:22:38
要很快的开发出反相固相萃取，最重要的是要了解目标分析物的化学和物理特性。
在目标分析物的种种化学和物理特性中，Log P（分配系数）特别重要。
Log P （分配系数）的定义：分配系数是一个非离子化的化合物在两种不互溶的溶剂中达到平衡后，在每种溶剂中的浓度比例。
一般用水（水相）和辛醇（Octanol疏水的有机溶剂）做为计算化合物分配系数两种溶剂。就是说，一个化合物加入这两种混合溶剂内，达到平衡后， 然后用UV/Vis来定量计算化合物在每一种溶剂中的量。
Log P 的决定是根据下面的方程式。
Log Poctanol/water = Log (溶质在辛醇的浓度/溶质在水中的浓度)
这个值可以反应出一个被分析物的亲水性和疏水性的程度
Log P = 1 表示10 ：1 有机 ：水性 （稍稍疏水性）
Log P = 0 表示 1 ：1 有机 ：水性 （亲水和疏水性相同）
Log P = -1 表示 1 ：10 有机 ：水性 （稍稍亲水性）
以下提供一些实际的例子， 以 Log P由小变大（疏水性逐渐增加）
（1）Urea （尿素） Log P = -2.11
（2）Dopamine（多巴胺） Log P = -0.98
（3）Atenolol （阿替洛尔） Log P = 0.16
（4）Picric Acid ( 苦味酸) Log P = 1.33
（5）Testosterone （睾酮） Log P = 3.32
（6）THC （四氢大麻醇） Log P = 7.6
由化学结构可以知道尿素是比睾酮极性大，但是Log P的计算可以定量出尿素比睾酮的极性大100，000 倍。现在让我们看看如何利用 Log P 来协助我们固相萃取的方法开发。
最成功的固相萃取的方法是充分利用“开和关”的原则，就是说：是否被分析物能否完全吸附或是完全没法吸附在固相萃取填料上？一个分析物的Log P 是回答这个问题的很好的工具，特别是在反相固相萃取的方法开发。
（1） 当使用Strata X（高分子基质）时， 基本原则是这填料可以吸附非离子化化合物的Log P大于-1.0
（2） 当使用 Strata- C18-E（硅胶基质）可以吸附非离子化合物的Log P大于+ 1.0
所以说， Strata-X可以被用来吸附稍带极性的化合物。我们再进一步举个实例，上面提到的化合物中，尿素的Log P 是-2.11 ，就没办法使用Strata-X 或是 Strata-C18-E。同样的，多巴胺和阿替洛尔，没法使用Strata-C18-E， 因为这两个化合物的Log P都是小于+1.0。
Log P 也可以用来决定在反相固相萃取方法开发时要使用多强的溶剂来清洗。Log P愈高时，意味着可以被吸附的很强，就可以用较激烈的方法来清洗。例如说使用Strata-X时，睾酮可以用60% 的甲醇来清洗。 这也可以说是预料之中，因为睾酮是非常大的疏水性化合物， 它的Log P是3.32 （如果需要睾酮的固相萃取的方法，可以和我们索取编号 – TN-0017）。
所以说一个化合物他的分配系数越大的话，洗脱得溶剂就要选择越是非极性的溶剂，才会得到较好的结果。在反相固相萃取中一般常用溶剂的强度比较列如下：甲醇（弱） <异丙醇 < 乙睛 < 醋酸乙酯 < 二氯甲烷 < 己烷 (强).
总之， 一个化合物的Log P是很好固相萃取方法开发的“指南针”。当然Log P只是其中的一个指导参数，我们在开发方法时还是不能忽略被分析物的其他性质，如此才能够全方位的考虑到所有性质已建立出最好的方法。
一开始时提到，Log P（分配系数）是非离子化的化合物所得到的一个数据，但是如果是离子化合物，又要如何使用反相的固相萃取的方法呢？我们会在下一期的固相萃取讲座来讨论。
想进一步了解固相萃取的方法开发，联系广州菲罗门
一.特别推荐资料： （1）固相萃取小分子方法开发，（2）Strata-X画册。
二.如果想找一些化合物的Log P， 可以试试以下以下资料：
1) http://sis.nlm.nih.gov/chemical.html2) http://www.chemicalize.org/
Strata-X 是Phenomenex的专利产品 |
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