假单胞菌属检验方法

上一篇 / 下一篇  2013-02-15 17:56:48

样品先在GVC增菌液中进行增菌,然后划线接种于PDA平板,挑选可疑菌落进行革兰氏染色观察及氧化酶试验。如为革兰氏阴性小杆菌,氧化酶试验阴性,再接种于卵黄琼脂平板和SS平板。
  从卵黄琼脂平板上挑取卵磷脂酶阳性、并带有彩虹环的单个菌落,接种于马铃薯-葡萄糖琼脂斜面,获得纯培养物。
  将纯培养物分别接种于 Hugh-Leifson培养基,蛋白胨水,缓冲蛋白胨水,西蒙氏柠檬酸盐培养基,糖发酵管及苯丙酸培养基,进行生化反应试验。
  同时利用纯培养物进行血清分型鉴定。
  初步鉴定为椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌株,进行产毒培养和小鼠毒力试验,同时进行米酵菌酸的测定。

三、说明:

  1.分离培养:
  该菌在马铃薯-葡萄糖琼脂平板上菌落为1~2mm灰白色或乳黄色,光滑、湿润,边缘整齐,培养48h后,中心有凸起,呈草帽状,菌落周围产生黄绿色色素,扩散到基质中。
  在卵黄琼脂平板上,菌落表面光滑,湿润,48h后,菌落周围形成乳白色混浊环,在斜射日光下,可见环的周围呈现虹彩现象。
  该菌在SS琼脂平板上不生长。

  2.O/F试验
  将该菌培养在Hugh-leifson培养基,方法是挑取少量培养物做穿刺接种,同时接种两支培养基,其中一支于接种后滴加溶化的1%琼脂1~2mL于表面,放30℃培养。该菌为氧化型。封口培养不产酸,开口培养产酸。

  3.本菌与假单胞菌的鉴别
  椰毒假单胞菌酵米亚种与椰毒假单胞菌各种培养性状,生物第学性状基本一致,只在侧金盏花醇的利用上有区别。椰毒假单胞菌酵米亚种侧金盏花醇为阳性。

  5.米酵菌酸的判定
  从中毒样品中提取米酵菌酸,包括发酵食品或变质银耳,或分离出的椰毒假单胞菌酵米面亚种中提取的米酵菌酸,其米酵菌酸含量必需≥0.25mg/kg(食品)才有意义。


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