关于注射用辛芍中甘露醇含量的测定研究

上一篇 / 下一篇 2013-02-18 22:20:01

注射用辛芍是由灯盏细辛和赤芍经提取加工制成的冻干粉针[1]，临床用于治疗中风瘀血阻络证,能迅速改善脑缺血临床症状,对急性脑缺血、缺氧具有良好的治疗作用[2]。甘露醇是注射用辛芍的赋形剂(辅料)，国内外对制剂中甘露醇含量的测定多为比色法或滴定法等，在实验操作和准确度上欠佳。本实验用高效液相色谱法(HPLC)测定注射用辛芍中甘露醇含量，该方法操作简便、快速灵敏、重现性好,可作为该制剂质量控制指标之一。

1材料与方法

1.1试药

甘露醇对照品(中国药品生物制品检定所，批号100534200301)，乙腈(色谱纯)、重蒸水。注射用辛芍冻干粉针(贵阳医学院药物研究所，批号20040510，20040518，20040520)。

1.2仪器

LC-10Avp高效液相色谱仪系列(岛津公司)，含2台LC10ATvp输液泵，岛津RID-6A示差折光检测器，7725i手动进样阀。WML色谱工作站(广西威玛龙色谱科技公司)。

1.3色谱条件

参考文献[3～6]，采用LichromsobNH2色谱柱(4.6mm×250mm，5μm)，乙腈水(82∶18)为流动相，流速为 1ml/min，柱温为40℃。试验条件下各组分分离良好，理论塔板数按甘露醇峰计为4300，阴性对照品溶液无干扰(图1)。图1注射用辛芍供试品高效液相色谱结果

Fig.1HPLCchromatogramsofXinshaofreezedriedinjectionsample1.4溶液的制备

1.4.1对照品溶液制备精密称取甘露醇对照品200.5mg，置25ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。

1.4.2供试品溶液制备取供试品400mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

1.4.3阴性对照品溶液的制备按注射用辛芍(冻干粉针)处方制备不含甘露醇的阴性对照品,按供试品溶液的制备方法制备阴性对照品溶液。

2结果

2.1线性关系考察

精密吸取已制备好的对照品溶液1.5、2、2.5、3、3.5ml于5个10ml容量瓶中，分别加水稀释至刻度，摇匀，制得每1ml分别含 1.203、1.604、2.005、2.406、2.807mg的系列对照品工作液。分别精密吸取上述系列对照品工作液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积(A)为纵坐标，进样浓度C(g/L)为横坐标，绘制工作曲线，用最小二乘法进行线性回归计算，得回归方程为 A=446501C12029，r=0.9999，表明甘露醇进样浓度在1.2～2.8g/L范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.2精密度试验

2.2.1重复性试验取同一批号供试品制剂，按供试品溶液制备方法制备9份供试液，按拟定好的色谱条件进样测定，甘露醇平均含量为5.041%，RSD为1.8%。

2.2.2中间精密度试验按成品中甘露醇供试品溶液制备方法制备3份供试品溶液，在不同日期、以不同分析人员分别测定，甘露醇含量平均值为5.050%，RSD为2.0%。

2.3稳定性试验

取同一批号供试品，按1.4.2项下方法制备供试品溶液1份，分别于0、2、4、6、8h进样，结果平均峰面积为884602，RSD为1.2%，供试品溶液在8h内稳定。

2.4回收率试验

采用加样回收率试验，精密称取已测定甘露醇含量的成品(含量5.041%)适量，精密加入甘露醇，按供试品溶液制备方法制备供试液，测定，甘露醇平均回收率为99.54%，RSD为2.4%，见表1。表1回收率试验结果

2.5样品测定

取成品制剂，按供试品溶液的制定方法制备供试品溶液及对照品溶液，分别进样20μl，记录色谱，测定峰面积，计算甘露醇含量，3批样品测定结果为9.85mg/支，10.2mg/支，10.7mg/支。

3讨论

实验采用的甘露醇含量测定方法是根据中国药典2005版一部附录《中药质量标准分析方法验证指导原则》要求，通过对方法的专属性、线性、精密度(重复性、中间精密度)、准确度等试验考察,较原《中药新药质量标准研究的技术要求》对含量测定方法学考察更为全面。

在系统适用性试验中，甘露醇的保留时间约为16.5min，阴性对照在甘露醇出峰位置处无干扰杂质峰，供试品中甘露醇与杂质峰分离度大于1.5，理论塔板数以甘露醇峰计算为4300，故规定理论板数以甘露醇峰计算应不低于3500。