PCR产物及凝胶回收试剂盒--MagExtractor®-PCR & Gel Clean u

 —目录—

[1] 前言 ........................................................................................... 1

[2] 纯化流程...................................................................................... 2

[3] 试剂盒中所包含的物品................................................................. 3

[4] 试剂盒以外所需要的其他物品...................................................... 3

[5] 回收DNA溶液............................................................................. 4

[6] 回收琼脂糖凝胶........................................................................... 5

[7] 疑难解答...................................................................................... 8

 

       本试剂盒中所包含的都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等场合。在使用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，注意安全。由于本试剂盒内含有对人体有害的试剂，所以请务必严格遵守各试剂的相关使用说明书，按要求使用保护罩等防护措施。

 [1] 前言

       MagExtractor - PCR & Gel Clean up-利用在Chaotropic（盐）试剂存在的情况下，核酸能吸附在硅胶上的特性^1），用于手动对DNA片段进行纯化。本试剂盒采用磁硅胶粒子，若使用磁性台架，则能最大限度地减少复杂的离心操作，能够快速地的纯化DNA片段。

 下图显示为使用MagExtractor-PCR &

  Gel Clean up-时的纯化流程。

       本试剂盒中包含以下试剂。（200次份）

 

*吸附液，洗净液在低温情况下会析出结晶。请一边用手捂暖，一边

将其倒转混合让结晶溶解后使用。另外，吸附液及洗净液内含有蛋白

变性剂。在使用时务必注意，万一沾到身体，请立刻用清水冲洗。

 

·灭菌蒸馏水<溶出液>

·75％乙醇<洗净用>

 

·1.5ml小型试管用磁性台架

·简易台式离心机

·漩涡混合器

·Heat Block 55℃（用于在需要去除混于回收液中的乙醇的场合）

 

*可使用本公司的磁性台架Magical Trapper（Code No.：MGS-101）等产品。

 [5] 回收DNA溶液
 
1．前言
·本操作程序用于从DNA溶液（约100μl）中回收DNA片段。
·能够回收的DNA大小约为100bp～50kb。另外，40bp以下的核酸
几乎能够被加以除去。
· 磁珠的最大吸附量为每30μl磁珠大约吸附5μg。使用时请以2.5μg左右为参考量。
·能够从PCR反应液，限制酶反应溶液，碱性磷酸酶反应液等各种反
应液中回收DNA。
·回收后的DNA，能够用于限制酶处理、测序、连接、标记、杂交等多种反应

DNA溶液（100μl）^1）

↓← 400μl吸附液

↓← 30μl磁珠²⁾

↓不时用漩涡混合器搅拌，并放置约1～2min（室温）

B/F（固/液）分离^3）

↓←（600μl洗净液）^4）

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^3）

↓←1ml75％乙醇^4）

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^3）

瞬时高速离心，彻底去除上清部分。

（打开小型试管的盖子，55℃下放置5min，干燥）^4）

↓←25～100μl蒸馏水

↓漩涡混合器搅拌10sec，

（在无法充分将粒子分离的情况下，请用pipetting来分离粒子。）

↓放置2min

B/F分离，回收上清液。^5）

1）请尽量不要含矿物油。

2）使用磁珠前，请彻底悬浊混合后再使用。

3）将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去除

上清部分。通过乙醇清洗时，可以通过将上清液倒入其他容器进行去除。

B/F分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m程度，5sec.的离心进行分离。g会根据离心机的转子口径而发生变化，所以请调整旋转数，使得能更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。

4）请参照3.的表。

5）回收液中少量混入的磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附度

等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。

 

·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）

 

·根据DNA溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净

液和磁珠的使用量。此时，无需减少75％乙醇溶液的使用量。

·本操作程序适用于从TAE或者TBE琼脂糖凝胶（约0.3g）中回收

DNA片段。本操作程序是以琼脂糖浓度2％以下的凝胶为对象。

要使用2％以上的凝胶时，推荐所使用凝胶的量少于0.3g。另外，本

操作程序不需要使用特殊的低融点琼脂糖凝胶。

·能够回收的DNA大小约为100bp～50kbp。

·回收后的DNA主要用于连接反应、标记、测序等反应。

 

琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色。

↓

在UV照射下（Long wave），为了使得目标条带尽可能地变小，使

用切割刀或手术刀等进行切开。

↓

把切开的琼脂糖切细，放到1.5ml小型试管中。（此时称得重量，如

果大于0.3g则分几次进行。）^1）

↓←400μl吸附液

在凝胶完全溶解之前，将其放置在室温中，并不时进行搅拌。^2）

↓←30μl磁珠^3）

↓经常用漩涡混合器搅拌，并放置2min（室温），

B/F分离。^4）

↓←600μl洗净液

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^4）

↓←1ml75％乙醇溶液^5）

↓漩涡混合器搅拌10sec，

B/F分离。^4）

瞬时高速离心，彻底去除上清部分。

（打开微型试管的盖子，55℃下放置5min，干燥）^5）

 

↓←25～100μl蒸馏水

↓漩涡混合器搅拌10sec

（在无法充分分开粒子的情况下，请用pipetting来分散粒子。）

↓放置2min

B/F分离，回收上清液^6）

 

1）   将琼脂糖凝胶制成切片，以利于溶解。

2）   如果想要快速溶解琼脂糖凝胶或凝胶难以溶解时，请加温至55℃

5min。

3）   使用磁珠前，请彻底混合后再使用。

4） 将试管放置在磁性台架上，把磁珠挪近磁石，用微量移液器持续去

除上清部分。要洗净乙醇，也可以通过将上清液倒入其他容器来去除。

B/F分离时推荐使用对应于微型试管的磁性台架，但也可使用简易台式离心机，用大约6,000r.p.m程度，5sec.的离心进行分离。g会根据离心机的转子口径而发生变化，故请调整旋转数，使得更有效地集合粒子，并保证凝结不至于过度。

5） 请参照3.的表。

6） 回收液中混入少量磁珠并不会有碍下一次的反应，但在测定吸附

度等场合时，请通过瞬时高速离心除去磁珠。

 

·洗净工序，加热工序可以省略（请参照下表）

*从琼脂糖凝胶中回收核酸时，必须用洗净液清洗。

 

·根据DNA溶液的量，可以按比例减少本试剂盒中附带的吸附液、洗净

液和磁珠的使用量。此时，无需减少75％乙醇溶液的使用量。