plasmid DNA的抽提•纯化试剂盒-MagExtractor®-Plasmid

 

 

 

       本试剂盒中所包含的试剂都是研究用试剂。请不要用于诊断，临床等场合。在使用本试剂盒的时候，请严格遵守实验室的基本注意事项，并注意安全。

 

MagExtractor -Plasmid-利用在Chaotrpic（盐）试剂存在的情况下，核酸能吸附在硅胶表面的特性，进行plasmid DNA的抽提·纯化。磁性体使用的是封入的磁珠，所以能够利用永久磁石很容易地分离回收核酸。磁珠依据吸附条件，分别对蛋白质，DNA，RNA等不同物质 具有不同的吸附能力，所以能够简便地纯化核酸。本试剂盒除了作为用于全自动核酸抽提装置MFX-2000的试剂外，也可以作为手动抽提试剂盒来使用。

 

·能够从大肠菌中抽提·纯化出plasmid DNA

·能够回收3～6μg的plasmid DNA（50～150ng/μl）^*1，可用于转化，限制酶处理，DNA 测序反应等。

       ·能在10～15min之内抽提出plasmid DNA。

       ·不使用苯酚、氯仿等危险溶液。

       ·无需乙醇沉淀。

 

MagExtractor -Plasmid-准备了四种对应于MFX-2000，二种对应于手动的操作程序。使用对磁珠不进行干燥处理的操作程序（手动操作程序Ⅰ以及MFX- 2000的”Speedy”和”Lowcost”等操作程序）所得到的回收液，需要注意以下几点。

·对于限制酶及转化处理，可直接加以使用。

·琼脂糖电泳时的Loading Dye必须使用本试剂盒附带的产品。使

用一般的产品组分时，可能样品会无法沉淀。

·当用于DNA测序时的模板时，乙醇会阻碍测序反应，可将回收液置于1.5ml试管内，保持试管打开状态加温至78℃ 40min。（也可只加温处理必要的剂量。参考13页。）

·为了不让乙醇混入回收液中，请使用手动操作程序Ⅱ（参

考12～13页），如果是MFX-2000的场合下，请使用”Dryup”

或”Fullauto”等操作程序。

 

本试剂盒中含有能够进行500次plasmid DNA回收的试剂量。

 

 

 

·灭菌水（蒸馏水或者milliQ水经过高温高压湿热灭菌）

·乙醇溶液（99.5％以上的特级品，使用手动法的时候用70％

的乙醇溶液）

       ·微量移液器

       ·微量移液器用的tip头

使用MFX-2000的场合，必须配备以下物品。

       ·抽提专用试管（Code No：MFX-301）

       ·抽提专用6连试管（Code No：MFX-302）

       ·附带专用过滤器的tip头（Code No：MFX-402）

 

 

       ·试剂设置用试管（50ml用，15ml用，2ml用^*1）

使用手动法的场合，必须配备以下物品

       ·1.5ml小型试管用的磁性台架（商店有售）

       ·漩涡混合器或者小型试管混合器

       ·简易台式离心机（12,000r.p.m.）

 

MagExtractor -Plasmid-通过以下五个工序对Plasmid DNA进行抽提和纯化。

使用MagExtractor -Plasmid-和MFX-2000时，上述的②～⑤可成为自动化操作。

 

       培养含Plasmid DNA的大肠杆菌。培养基可使用和通过LB，TB等碱性SDS法等方法来抽提Plasmid DNA的时候同样的培养基。由于Plasmid的回收量受拷贝数量以及菌体数量影响，推荐使用使MagExtractor -Plasmid-能够使回收量更加稳定的MMI培养基。使用MMI培养基的情况下，菌体量和TB的情况等同（JM109 / pUC18，50μg / ml氨苄青霉素9～11O.D.）。

 

 

       使用MagExtractor -Plasmid-能够处理的菌体量在手动法时是12～13O.D.，使用MFX-2000时是5～9 O.D.。根据菌体量和抽提方法的不同所引起的回收量的不同可以参考下图所示。在使用MFX-2000处理10 O.D.以上的剂量时，有可能会无法进行充分的搅拌（pipetting），使得纯度下降，请务必注意。使用angle rotor对1.5ml试管进行集菌时，菌体量请按照图2所示为标准。

       ·请将培养液置于1.5ml试管中。

       ·请用12,000rpm离心分离2min。

       ·请仔细去除上清部分。

                                          菌体量（O.D.）

       图1：菌体量的不同引起的回收量的变化（JM109 / pUC18，MMI培养液）

                                    过少    适量     过多

图2：菌体量的标准

 

·溶解液

       请按照4:1（v:v）的比例对试剂盒中的溶解液Ⅰ^*1，Ⅱ进行混合。请将此混合液在室温下保存，三周后请勿继续使用^*2。通过手动法抽提的时候需要150μg / 样品。使用MFX-2000的时候，请参考第九页的表【各试剂的使用剂量标准】进行制备。

       ·70％乙醇溶液

       只有在使用手动法的时候使用。需要1500μg / 样品。

 

       在使用MFX-2000前，请务必阅读MFX-2000的使用说明书。使用抽提程序中的”Dryup”或”Fullauto”程序时，需要有加温的功能^*3。请使用标准式样（加温，简易保温功能 / Code No.：MFX-102）或者是特殊式样（加温，电子冷却功能 / Code No：MFX-103）。

       MFX-2000中准备了4种可供抽提Plasmid DNA用的操作程序。选择其中一个，将其号码输入在液晶画面中。

       ·一次操作只能选择其中一个操作程序。

       ·下表的抽提时间不包含分装时间。实际的抽提时间根据样品不同

会有所变化，以下表的抽提时间 x 样品数 x 1.25（小时）为标准。

 

^*1 用途A：用于限制酶处理，转化

用途B：DNA 测序，或使用回收液超过50％时的反应。

^*2 通过手动法进行去除乙醇的操作后便可以进行DNA 测序。

 

^*2 Plasmid DNA的回收量和纯度有时会降低。

^*3 如果只使用”Dryup”或”Fullauto”操作程序，请使用基本样式的

MFX-2000（简易保温功能 / Code：MFX-101）。

 

·操作程序 “31：Speed”

适用于限制酶处理以及转化用Plasmid DNA的制备。将再次悬浊液置于MFX-2000中，大约在10min / 样品下抽提出Plasmid。

·操作程序 “32：Dryup”    “33：Fullauto”

适用于DNA 测序用Plasmid DNA的制备。处理较多菌体（7～9O.D.）时适合使用针对再次悬浊液的 “32：Dryup”，处理较少菌

时（5～6O.D.）时适合使用针对集菌后的菌体的“33：Fullauto”。

·操作程序 “34：Lowcost”

使用通过以下的操作设置处理过的样品。由于仅使用专用试管1个/样品（其他操作程序时3～4个），故能够以较低成本回收Plasmid DNA，

并能够在6min / 样品下实现限制酶处理，以及转化用的Plasmid DNA的制备。

 

·简易冷却时，冷却block应事先在冷藏库或者冷冻库内冷却。

       ·请使用附带专用过滤器的tip头（Code No：MFX-402）

       ·tip已通过γ射线灭菌。戴上手套将需要量专用tip安装在tip架中。

       ·关于tip的安装位置请阅读MFX-2000的使用说明书。

 

·将需要量专用tip安装在tip架中。