建立蛋白质组学IEF条件优化讨论
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下一篇 2007-10-02 21:21:49/ 个人分类：转贴
在蛋白质组研究中，二维电泳还是主要的研究方式 当然起码现在国内是这样，对于二维电泳中其实样品的抽提 很关键 最后图图是否好看这个占5成，而大家的样品来源众多不同讨论起来比较困难 但是ief条件的优化也起码占了3成 而且这点在很多paper中都是略讲的 没有说得很清楚到底为什么用这种或者那种的条件，本人就为这个头痛了很久，抽提方法和paper一样材料差别不大，但是就是跑不好图图，ief的条件文章上一句参照手册就完了 很是头痛，又费钱又费精力。觉得集思广益 大家可以学到很多 先将我的知道的一些别人的一点经验提上来希望对新手有帮助
1 样品提取完后要定量 ，量大的样品需要的聚焦时间就长。最好先跑小量50ug-200ug左右比较好控制，一般可以参照手册上的总vhr做
2 如果样品中盐含量多 电压还是上不去 可以采取低电压多换滤纸的方法 一般在500v前加100v 250v 在这段时间可以更换滤纸
3 8000v前面可以加3000v 或者4000v 来使升压顺利
还有就是要在ief的过程中注意电流的变化
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