ADP/ATP比率测定试剂盒应用程序说明

ADP/ATP比率的变化已被用于区分细胞死亡和存活的模式。ATP水平升高和ADP水平降低表示细胞增殖。相反，ATP水平的降低和ADP水平的增加导致细胞凋亡或坏死，其中ATP的减少和ADP的增加在坏死中比在细胞凋亡中更明显。Assay Genie LumiDazzle ADP/ATP比率检测试剂盒提供了一种快速测量ADP和ATP水平的方法，用于筛选哺乳动物细胞的凋亡、坏死和细胞增殖。化验包括两个步骤。在第一步中，工作试剂裂解细胞以释放ATP和ADP。在荧光素酶存在的情况下，ATP立即与底物D-荧光素反应产生光。光强度是细胞内ATP浓度的直接测量。

艾美捷 ADP/ATP比率测定试剂盒：

目录代码：BA0127

包装尺寸：100assays

仅供研究使用

ADP/ATP比率测定试剂盒主要功能：

1、安全非放射性化验。

2、均匀方便。“混合培养测量”型测定。不涉及清洗和试剂转移步骤。坚固且适用于HTS：在96孔和384孔板中常规观察到0.5及以上的Z’因子。可以在HTS液体处理系统上实现

3、完全自动化，每天处理数千个样本。

应用程序

细胞凋亡和坏死的测定。

细胞增殖：细胞因子、生长因子、营养物质的影响。药物发现：抗癌药物的高通量筛选。

试剂盒内容：

测定缓冲液：10 mL

基质：120μl

共基质：120μl

ATP酶：120μl

ADP酶：120μL

储存条件：试剂盒在冰上运输。将所有试剂储存在-20℃。本产品以干冰装运。保质期：12

收到后数月。

注意事项：试剂仅供研究使用。使用试剂时，应采取实验室试剂的常规预防措施。有关详细信息，请参阅材料安全数据表。

化验程序：

可以在试管或96孔板中进行分析。为了保持一致性，建议三个发光测量对于所有样品是相同的。

测试程序：

可以在试管或96孔板中进行测试。为了保持一致性，建议所有样品的三次发光测量之间的时间相同。

1.样品制备。对于悬浮细胞，将10μL培养的细胞（10³-10'）转移到白色不透明的96孔板中。

粘附细胞：在白色不透明微孔板中培养10³-104个细胞。在测定时，在加入90μL ATP试剂之前立即除去培养基（见下文）。

2.ATP测定。将测定缓冲液、底物和共底物置于室温。在冰上或4℃下解冻酶。建议进行FreshReconstitution。将未使用的试剂（包括酶）储存在20°C下。

ATP试剂。对于每个96孔，将95μL测定缓冲液与1μL底物、1μL共底物和1μL ATP酶混合。向每个孔中添加90μL ATP试剂，并通过轻敲平板进行混合。1分钟后，读取铝量计上的发光（RLU A）。

3.ADP测定。制备ADP试剂：对于每个96孔，混合5μL dH₂O与1μL ADP酶作用。

在读取ATP（RLU A）的发光后10分钟，再次读取样品（RLU B）的发光。该测量在测量ADP（即残余ATP信号）之前提供背景。

读取RLU B后，立即向每个孔中添加5μL ADP试剂，并通过轻敲板或上下移液进行混合。1分钟后，在光度计上读取发光（RLU C）。

4.ADP/ATP比值的计算。从RLU C中减去RLU B，然后除以RLU A：RLUC-RLUB ADP/ATP比率=RLU A

文献参考：

1.Schafer ZT,et al.(2009). Antioxidant and oncogene rescue of metabolic defects caused by loss of matrix attachment.Nature.461(7260):109-113.

2.Bekeredjian R, et al.(2010). Conditional HIF-1alpha expression produces a reversible cardiomyopathy. PLos One. 5(7):

e11693.

3. Chandak PG, et al.(2010). Efficient phagocytosis requires triacylglycerol hydrolysis by adipose triglyceride lipase.JBiolChem.285(26):20192-201.

https://www.amyjet.com/products/BA0127.shtml