LC-MS/MS 测定牛奶中六种青霉素类抗生素残留

青霉素G、青霉素V、苯唑西林、氯唑西林、双氯唑西林、奈夫西林等均为宽带谱青霉素类抗生素，广泛用于兽药治疗中。该类药物用于产肉动物的呼吸、肠胃、泌尿生殖和皮肤病毒感染的治疗和预防，它的使用将引起肉用动物兽药残留的存在，这种残留将对青霉素过敏的人产生健康危害，更为重要的是，抗生素被过量食入健康人肠道，会破坏健康人肠道正常菌群环境，导致人体免疫力的降低为确保消费者的食品安全，欧盟已规定动物组织和牛奶中上述各种青霉素允许最大残留量分别为4～30μg/kg。美国FDA规定牛奶中青霉素类抗生素的安全限2.5～5μg/kg。
　　目前，对食品中青霉素类抗生素残留的分析方法仍然采用传统的微生物法和HPLC法。常规HPLC往往仅适宜于测定基质比较单一的样品，对于具有复杂基质的生物样品的抗生素，特别是痕量残留的抗生素，往往由于高的背景干扰而难于定量分析。E.Verdon,P.Couedor曾报道用柱前衍生-离子对高效液相色谱法测定牛奶中的异恶唑青霉素残留，但前处理步骤复杂，操作实验的重复性难以控制，其准确性和选择性较差；D.M.HoLstege等采用LC-MS测定了牛奶中5种β-内酰胺类抗生素残留。阿莫西林、氨苄西林、青霉素G、青霉素V、氯唑西林用乙腈从牛奶中提取出来，然后用C18反相液相色谱分离和质谱检测。SonjaRiediker和YukoIto也用LC-MS/MS来测定牛奶中的青霉素含量，准确性较好，但灵敏度不高。
　　本实验结合各方法的优点，样品采用乙腈沉淀法除蛋白，固相萃取浓缩富集，反相色谱分离，电喷雾离子化，在串联四极杆质谱仪中，多离子反应监测（MRM）定量法进行检测。最低检出浓度低于欧盟和FDA对牛奶中的青霉素类抗生素残留的限量要求，说明本方法可满足欧盟和FDA对牛奶中的青霉素类抗生素残留的限量要求。具有简单、准确、高效、稳定，选择性好、灵敏度高等优点。