蜂胶、杨树叶及杨树芽中水杨苷和芦丁6种用量比较

上一篇 / 下一篇 2009-04-22 14:48:39

蜂胶是意蜂采集杨树等植物的新生枝芽和愈伤组织的分泌物，并混入蜂蜡等其自身分泌物所形成的一种黏性物质。2005版《中国药典》开始收录蜂胶。市场上有人将杨树叶、芽等粉末掺人蜂胶中，得到的劣质蜂胶在颜色、气味、形状上都与真蜂胶十分相似，给蜂胶的鉴定工作带来了困难。本文对蜂胶及杨树叶、芽中的水杨苷和芦丁两种糖苷的含量进行了HPLC测定和比较。
　　一、仪器与试药
　　高效液相色谱仪(BWAICLC98II系统，P98II泵，UV98I紫外检测器)；超声波清洗仪(KQ-100B)；对照品，芦丁(Rutin，中国药品生物制品鉴定所)，水杨苷(D一(一)一SalicinSigma，公司)。乙醇(分析纯，北京化学试剂厂)，甲醇(色谱纯，天津四友)；水(娃哈哈纯净水)。
　　蜂胶样品10个，农业科学院蜜蜂研究所提供。杨树芽样品4个，分别为杨柳科植物毛白杨PopulustomentosaCarr．、北京杨Populusxbeijingensis、银白杨PopulusalbaLinn．和加拿大杨PopulusCanadensisMoench的叶，杨树芽为加拿大杨的新生芽，采自药植所植物园，本所标本馆米泰康先生鉴定。
　　二、方法与结果
　　1．供试品溶液制备
　　蜂胶、杨树芽样品：取0．5g，精密称定，置于100mL容量瓶中，加入50％L醇，超声提取30rain，静置，以50％L醇稀释至刻度，过滤，备用。
　　杨树叶样品：取1g，精密称定，置于100mL容量瓶中，加入50％乙醇，超声提取30rain，静置，以50％乙醇稀释至刻度。精密吸取上清液10mL于蒸发皿中，水浴挥干，残渣用少量50％乙醇溶解转移，定溶至lmL，过滤，备用。
　　2．对照品溶液的制备
　　分别精密称取水杨苷和芦丁对照品12．3mg和10．0mg置于10mL容量瓶中，加50％乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。
　　3．色谱条件
　　KromasilC185μ250x4．9mm；检测波长：268nm；柱温：25℃；流速：lmL／min流动相：甲醇-1．5％磷酸梯度洗脱。时间(min)[甲醇％(v／v)]如下：0[9]，30[1]]，40[35]，70[35]，71[100]，85[100]。
　　4．线性关系考察
　　分别精密吸取对照品溶液1，3，5，7，10／μl注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件测定。色谱峰面积(A)与进样量(C)有良好的线性关系。水杨苷的线性方程为：
　　Y=81497x+9606．6，r=0．9996。芦丁的线性方程为：Y=699220x+117415，r=0．9998。结果表明，水杨苷和芦丁分别在1．23~12．3~g和1．O~lO．O／xg范围内线性关系良好。
　　5．精密度试验
　　精密吸取对照品溶液10tzl注入高效液相色谱仪中，重复5次，结果水杨苷和芦丁的峰面积平均值分别为1．003×106和7．083X106，RSD分别为1．6％和2．0％。表明该方法精密度较好。
　　6．重复性试验
　　平行制备5份加拿大杨树叶样品溶液，按照上述方法测定含量，3次测定的水杨苷和芦丁的平均值分别为：4．5％和3．8％，RSD分别为1．4％和1．8％，该结果表明本法具有很好的重复性。
　　7．回收率实验
　　精密称取5份加拿大杨叶样品各0．5g，分别置于lOOmL量瓶中，加入水杨苷和芦丁对照品适量，加50％乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。准确吸取样品溶液101xl，注入高效液相色谱仪中(见表1、表2)。
　　8．含量测定
　　精密吸取10种蜂胶样品、4种杨树叶样品及1种杨树芽样品溶液各lOtxl，注入高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算水杨苷和芦丁含量。在10个蜂胶样品中均未检出水杨苷和芦丁。杨树叶、杨树芽样品中检出水杨苷和芦丁。
　　三、结果与讨论
　　本试验对蜂胶及杨树叶、芽中的水杨苷和芦丁两种糖苷的含量进行了HPLC测定。结果，在蜂胶样品中均没有检测出这两种糖苷。
　　在毛胶中直接掺入杨树叶或杨树芽粉末是一种比较常见的蜂胶掺假方法。本试验方法可用于检出直接掺有杨树叶或者芽粉末的掺假蜂胶。
　　通过前期文献调研，发现在几乎所有(仅1个例外)的蜂胶化学成分研究的文献中，均没有从蜂胶中分离得到苷类化合物的报道。因此我们提出，在蜂胶中可能不含有苷类物质。本文从实验数据上支持了上述观点。此外，有文献报道f21从蜜蜂咽下腺和蜂蜜中均分离得到糖苷酶。综合分析上述情况，我们认为，在蜜蜂采集加工蜂胶的过程中，胶原植物中的苷类物质被其分泌的糖苷酶水解成了苷元。
　　在我国蜂胶的国家标准和行业标准中，对蜂胶中黄酮类物质的测定，采用了比色法和高效液相色谱法，都以芦丁(槲皮素一3一芸香糖苷)作为标准物质。这些方法值得商榷。