液相色谱柱、液相色谱填料
特点:耐酸碱:pH1-14;对水、DMF等化学试剂均稳定、色谱填料粒径均匀,可实现从分析到制备的线性放大
高聚物型色谱柱对乙酰半胱氨酸及其有关物质的分离
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下一篇 2009-06-11 14:35:30 / 精华(1)/ 置顶(1)
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发布日期:2009-5-25 点击次数:26 |
乙酰半胱氨酸为合成谷胱甘肽的必需氨基酸,是一种含有巯基的抗氧化剂,具有抗氧化、抗炎,保护肝脏、肺、心脏和神经细胞等作用,用于治疗急性、慢性支气管炎以及其他原因引起的粘痰合并发生的肺部疾病[1,2]。乙酰半胱氨酸还可用于HIV病毒感染者的治疗,改善由于病毒引起的半胱氨酸缺乏患者的生理和免疫功能[3]。 乙酰半胱氨酸(1,图1)在生产过程中容易引入L-胱氨酸(2)、L-半胱氨酸(3)、N,N’-二乙酰胱氨酸(4)和N,S-二乙酰胱氨酸(5)等有关物质。目前各国药典对乙酰半胱氨酸的杂质均有严格的规定,其中《中国药典》2005版采用碘量法对乙酰半胱氨酸进行含量测定,但未对有关物质进行规定[4];《美国药典》28版使用HPLC及ODS柱,以苯丙氨酸为内标物,对乙酰半胱氨酸的含量进行测定,也未对有关物质进行规定[5];《英国药典》2003版使用ODS柱[6],利用离子对色谱法对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离,分离效果较好,但流动相使用的离子对试剂(庚烷磺酸钠)较为昂贵,检测成本高,并且流动相pH值较低,也会影响色谱柱使用寿命;另外《中国国家药品标准》(2007年1月1号实施)[7],的方法与《英国药典》2003版所述方法基本一致;《欧洲药典》52版[8]使用ODS柱,利用离子抑制色谱法对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分析,该方法所用流动相体系较为简单,但该分析方法流动相中有机相比例偏低(仅为3%),低于普通ODS柱承受下限(最低有机相比例为5%),并且流动相pH值也较低,长期使用对色谱柱的寿命有影响。因此开发一种更为适宜的检测方法对于乙酰半胱氨酸及其相关物质的检测具有实际意义。 本实验拟采用耐酸能力强并耐低有机相的高聚物型苯乙烯-二乙烯基苯为固定相,参照《欧洲药典》52版的流动相条件对乙酰半胱氨酸及其有关物质进行分离。
图1 乙酰半胱氨酸结构式 Fig1. Chemical structure formula of acetylcysteine
色谱条件 色谱柱:填料为高度交联的苯乙烯-二乙烯基苯(PS-DVB)微球,粒径5μm(南京麦科菲高效分离载体有限公司,型号:MKF-RP-MH,250mm×4.6mm)。流动相:0.02mol•L-1的磷酸盐缓冲液-乙腈,流速:1mL•min-1,进样量:20μL,柱温:25℃。 乙酰半胱氨酸在MKF-RP-MH色谱柱中的色谱行为: 所测乙酰半胱氨酸以及杂质均为弱酸性物质,因此参考《欧洲药典》52版的方法,结果如下:
注:图2-B中:线1、乙酰半胱氨酸、2、L-胱氨酸、3、L-半胱氨酸、4、N,N’-二乙酰胱氨酸和5、N,S-二乙酰胱氨酸对照品溶液的色谱图 由图2-B可知,各个色谱峰出峰顺序依次为L-胱氨酸、L-半胱氨酸、乙酰半胱氨酸、N,N’-二乙酰胱氨酸和N,S-二乙酰胱氨酸,各组分色谱峰顺序与《欧洲药典》一致。
讨论 本实验使用高聚物型MKF-RP-MH色谱柱,以磷酸缓冲盐为流动相体系对乙酰半胱氨酸以及其四种有关物质进行了分离,并达到了良好的分离效果。该方法对比现行的各国药典方法均有所改进,具有更好的适用性,可为乙酰半胱氨酸原料的质量控制和质量标准的进一步提高、完善做参考。
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