反相色谱中 乙腈与甲醇作为流动相的区别

        乙腈价格高，特别是HPLC级的价格很高！但是，文献或LC厂家所示的条件，多用乙腈，这是为什么呢？现就此谈谈。

1、吸光度，乙腈HPLC级的小。

         乙腈和甲醇的市销HPLC级和优级的吸收光谱中，乙腈HPLC吸收最小（特别是在短波长上小）。所谓HPLC级是除去具有吸收UV的杂质，在规定的波长上吸光度限制在规格值以内。在UV检测时，产生的噪声小，因此在进行UV短波长上的高灵敏度分析时乙腈HPLC级最适宜。另外，在UV检测中的梯度基线上也是乙腈HPLC级产生鬼峰少，虽然，其他与水相溶性高的有机溶剂有各种各样，但很难能找到比乙腈HPLC级吸收更小的。另外，甲醇的HPLC级和优级，虽然所得的光谱相差不大，但是优级不能保证吸光度，有可能产生偏差，价格也相差不大，所以尽量使用HPLC级。

 2、压力，乙腈低。

         柱内承受的压力，根据有机溶剂的种类或混合比率的不同而异，水/乙腈、水/甲醇混合液的比率与输液压力的关系中，甲醇与水混合，压力增高，而乙腈同样与水混合却并不如此。所以，乙腈在同样的流速下不在柱内加上多余的压力。从上述两项，可以确认使用乙腈的意义。那么，甲醇除了价格以外，还有没有其化优点呢？

3、洗脱能力，一般而言，乙腈较强；但当有机溶剂量接近100%时，甲醇强。

        乙腈和甲醇分别用同样的比率与水混合时，一般情况下，乙腈的洗脱能力强。特别是混合比率低时。从咖啡因和苯酚的洗脱来看，获得同样的保留时间，乙腈的比率只需甲醇的比率的一半以下即可。另一方面，有机溶剂100%或与此极接近时，从胡萝卜素和胆甾醇来看，常常都是甲醇的洗脱能力强。混合比在50：1等较为特殊时，调制的误差大，影响保留时间，或平衡化的时间长，乙腈遇到这种情况时，用甲醇的10：1混合代替乙腈，这样操作方便些。溶剂受温度影响时，不采用容器定量，而采用重量的方法（考虑比重），可使混合比的误差减小。

 4、分离（洗脱）的选择性。

        两者的差异是乙腈和甲醇在分离的选择性上不同。这是由于有机溶剂分子的化学性质（甲醇和乙醇是质子性，乙腈和四氢呋喃是非质子性）不同所致。因此，在用乙腈类不能获得分离时，就试用甲醇类看看！