活细胞成像技术的实验文献（活细胞成像专题之十）（Microimage 译）

　　在活细胞成像中，荧光融合蛋白做为定位Marker的应用开创了这一领域新概念。活细胞成像技术很广泛，包括宽场荧光、共聚焦、多光子、TIRF、FRET、荧光寿命周期成像、透射光显微镜。参考文献如下，能帮助全面的理解活细胞成像。

　　1、Khodjakov, A. and Rieder, C. L.

　　对活体细胞培养分裂过程的成像I Methods 38: 2-16 (2006).

　　摘要：在用光学显微镜观察培养细胞的有丝分裂时，我们发现了一些问题。最突出的难题是既要得到研究所需的时空分辨率，又要保持细胞的存活，这其中需要折中。固定细胞成像的结构受成像系统质量和样品本身光学品质的影响，而活细胞成像的最大局限是照明时导致的辐射损伤问题。这儿我们讨论如何减小这种损伤，保持细胞健康的生活在多模式多维度光学显微镜下。

　　2、Goldman, R. D. and Spector, D. L. (eds.)

　　活细胞成像，实验室手册. Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, New York, 631 pages (2005).

　　摘要：30章内容，笔记体写作，这个手册可能是描述活细胞成像这一话题最重要的资料。内容涉及荧光技术、成像应用和某些模式系统的特定实例。

　　3、Shaw, S. L.

　　植物活细胞成像. The Plant Journal 45: 573-598 (2006).

　　摘要：观察活细胞揭示的生命现象能给所要研究的课题提供独特的视觉。由于植物活体对成像系统中的强光会做出反应，因此活细胞采集的信号不同于固定样品得到的数据。此外，植物活体细胞一般比较厚，有自发光，然而当样品被固定或切割时，发光的荧光分子常常会消失。对于固定细胞，最直接的目标就是最大化衬度和分辨率。对于活细胞，最大化的衬度和分辨率可能会损害样品或快速的漂白荧光探针。因此目标是不同的。活细胞成像是在图像质量和获得不断增长的衬度和分辨率等信息中寻求一种平衡。要成功的收集活细胞的数据需要开发出样品采集程序、，慎选择和搭配显微镜系统，清楚了解显微镜系统怎样产生好的衬度和分辨率。这篇文章将讨论活细胞成像的一般问题和植物活细胞成像的需要特别考虑的地方。

　　4、Stephens, D. J. and Allan, V. J.

　　活细胞成像的光学显微镜技术. Science 300: 82-86 (2003).

　　摘要：这儿简短讨论显微镜下的细胞培养的环境条件，这篇综述重点介绍了选择合适设备的重要性、漂白恢复的假象、光毒性等，还详细介绍了透射光、多光子、共聚焦、TIRF、FRET、FLIM、宽场荧光显微镜成像方法。

　　5、Dunn, G. A. and Jones, G. E.

　　显微镜下细胞的运动性: Vorsprung durch Technik. Nature Reviews Molecular Cell Biology 5: 667-672 (2004).

　　摘要：这是一篇关于活体成像系统历史的文章，从显微镜的发明开始描述。这篇综述集中在活细胞运动观察以及他们对大量样品采用的技术。还讨论了在时序成像种设备的改进、显微科学中电脑的使用、荧光蛋白的使用等。

　　6、Gerlich, D., Mattes, J., and Eils, R.

　　细胞结构的动态定量分析和观察. Methods 29: 3-13 (2003).

　　摘要：作者在这提出对活细胞成像动态数据分析的看法。讨论内容涉及样品识别、分割、设置阈值、体素扫描、展示、自动分析和相关的计算方法等。还提到了活细胞图像分析的商业软件包。

　　7、Swedlow, J. R. and Platani, M.

　　宽视场荧光显微镜和反卷积的活体成像技术. Cell Structure and Function 27: 335-341 (2002).

　　摘要：带有GFP细胞标记的应用近来使得大量的细胞生物学研究能够进行下去，作者在这篇文章中描述了活细胞成像中不同荧光标记分子的优势和劣势，另外讨论了为保持活细胞和组织在显微镜上成像根本的考虑， 同时还提到数据的收集和分析技术。

　　8、Hinchcliffe, E. H.

　　Using long-term time-lapse imaging of mammalian cell cycle progression for laboratory instruction and analysis. Cell Biology Education 4: 284-290 (2005).

　　摘要：最近，以荧光蛋白为基础的荧光成像技术和高质量荧光成像系统的使用，在活细胞和分子生物学领域引发了一场革命。活细胞成像，尤其是荧光的使用，在科研和商用实验室得到广泛使用。这个技术的使用需要特点关注细胞工程技术、图像采集系统的设计、成像原理以及后续的处理和分析方法。在这篇综述里，我们讨论了这些步骤，把重点放在能为我们和其他人使用的实用技术上。

　　9、Jaiswal, J. K., Goldman, E. R., Mattoussi, H., and Simon, S. M.

　　量子点活细胞成像技术。 Nature Methods 1: 73-78 (2004).

　　摘要：这是一篇介绍量子点在活细胞成像中的应用的原理性综述，文章讨论了用这种荧光技术时细胞株、共轭技术、试剂、培养条件、标记限制和成像注意事项。

　　10、Kohlwein, S. D.

　　美丽的酵母菌：活细胞成像的光学分辨率限制。 Microscopy Research and Technique 51: 511-529 (2000).

　　摘要：酵母菌Saccharomyces cerevisiae对于细胞生物学研究非常有用。近来在电镜的荧光蛋白技术和其他体外染色技术使得象酵母菌这么小的细胞的动态和结构也能被深入观察。我们总结了酵母菌的显微染色技术和活细胞或固定细胞标签的定位研究。电子光学显微镜，去卷积技术，激光共聚焦显微镜等先进技术都被用到酵母的结构分析上。 51:511-529, 2000. © 2000 Wiley-Liss, Inc.

　　原文链接：http://zeiss-campus.magnet.fsu.edu/referencelibrary/livecellimaging.html