AMH(抗缪勒氏管激素)

产品名称：	AMH(抗缪勒氏管激素)
产品货号：	DSL-10-14400
产品规格：	96T
产品价格：	6500
产品厂家：	DSL

 

抗缪勒氏管激素（MIS/AMH）ELISA试剂盒使用说明书

【用途】

本试剂盒用于定量测定血清中缪勒氏管抑制物/抗缪勒氏管激素（MIS/AMH）的浓度。

 

【临床意义】

缪勒氏管抑制物（MIS），也叫做抗缪勒氏管激素（AMH），是由两个72kDa的单体通过二硫键连接构成的二聚体糖蛋白。MIS/AMH属于转化生长因子-β（TGF-β）超家族，该家族包括TGF-β、抑制素和激活素糖蛋白等。这个家族所有的成员都是二聚体糖蛋白，都与调节组织生长与分化有关。人类的MIS/AMH基因编码有一定的序列而且是孤立的，位于19号染色体短臂上。MIS/AMH的特异性受体也是独特的，具有特异性。

在男性，MIS/AMH由睾丸支持细胞产生，而在女性，MIS/AMH由卵巢颗粒细胞产生。在男性的胚胎发育期，睾丸支持细胞分泌的MIS/AMH促使缪勒氏管衰退，因此维持了男性生殖管道的正常发育。在女性，缪勒氏管是子宫、输卵管、阴道上段的胚胎原基。在男性，睾丸支持细胞从胚胎形成期开始分泌MIS/AMH，此后贯彻终生。青春期后，MIS/AMH的水平缓慢下降到一个相对较低的值。在女性，血清MIS/AMH的水平非常低，直到青春期才增高。直到更年期，循环MIS/AMH都维持在一个相对较低的水平。在更年期，MIS/AMH下降到无法检测的水平（用免疫方法检测不到）。

MIS/AMH可能的临床应用包括女性卵巢储备和围绝经期的研究、颗粒细胞肿瘤的检测与治疗、早熟及晚熟的诊断、两性畸形的诊断、隐睾和无睾丸畸形的诊断、男性生殖功能的评估。

 

【检测原理】

ACTIVE^® MIS/AMH ELISA试剂盒使用酶放大双位点免疫检测法。在实验中，标准品、质控、待测血清样本在包被有抗MIS/AMH IgG抗体的微孔板中孵育。孵育及洗板之后，所有孔加入生物素标记的抗MIS/AMH抗体。再孵育及洗板之后，每孔加入链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。第三次孵育及洗板之后，每孔加入TMB底物，孵育。最后加入终止液，在450nm和620nm波长测吸光度。

测得的吸光度与样本中的MIS/AMH浓度成正比。标准品用于描绘标准曲线，待测样本的浓度可从此曲线上读出。

 

【试剂组成】

A、  包被有抗MIS/AMH IgG抗体的微孔板（Anti-MIS/AMH-Coated Microtitration Strips）：

1板，96孔，2-8ºC下密封保存。

B、  标准品A/样本稀释液（MIS/AMH Standard A/Sample Diluent）：

1瓶，20ml，含0 ng/mL MIS/AMH。蛋白基缓冲液，含非汞防腐剂。准确浓度见瓶上标签。2-8℃下保存。

C、  标准品B-G（MIS/AMH Standard B-G）：

6瓶，每瓶0.5ml，含MIS/AMH的浓度约为0.05、0.10、0.25、1.8、7.5、15ng/mL。蛋白基缓冲液，含非汞防腐剂。准确浓度见瓶上标签。2-8℃下保存。

D、  质控（MIS/AMH Controls）：

2瓶，每瓶0.5ml，浓度I、II，含低浓度和高浓度的MIS/AMH。蛋白基缓冲液，含非汞防腐剂。准确浓度见瓶上标签。2-8℃下保存。

E、  抗体-生物素结合物（即用型）（MIS/AMH Antibody-Biotin Conjugate-RTU）：

1瓶，11ml，含有生物素标记的MIS/AMH抗体。蛋白基缓冲液，含非汞防腐剂。2-8℃下保存。

F、  酶结合物（即用型）（Streptavidin-Enzyme Conjugate-RTU）：

1瓶，11ml，含有链霉和素-辣根过氧化物酶结合物。蛋白基缓冲液，含非汞防腐剂。2-8℃下保存。

G、 检测缓冲液（MIS/AMH Assay Buffer）：

1瓶，12ml，蛋白基缓冲液，含非汞防腐剂。2-8℃下保存。

H、  TMB底物溶液（TMB Chromogen Solution）：

1瓶，11ml，含TMB和过氧化氢的柠檬酸盐缓冲液。2-8℃下保存。

I、    浓缩洗液（Wash Concentrate）：

1瓶，100ml，含非离子型清洁剂的缓冲盐溶液。2-8℃或室温下保存。

J、   终止液（Stopping Solution）：

1瓶，11ml，含0.2 M硫酸。2-8℃或室温下保存。

 

【样本收集与准备】

使用血清样本，静脉穿刺术采集血液。血清于2-8℃可保存24小时，-20℃或以下可长期保存。避免反复冻融样本。不应使用严重溶血或高脂血的样本。使用前冰冻的样本应解冻并充分混匀。

 

【试剂准备】

1、   洗液：使用前用去离子水将浓缩洗液稀释10倍。稀释的洗液在室温密封条件下可保存1个月。

2、   微孔板：选择实验所需数量的板条。剩余不用的部分随同干燥剂密封放回原袋。

 

【操作步骤】

使用前将所有试剂和样本平衡至室温（~25℃）并充分混匀。标准品、质控及待测样本应同时做双份。

注意：实验前，所有浓度超过最高标准品浓度的血清样本都应用0ng/mL的标准品稀释并充分混匀。儿童的样本应按1:10用0ng/mL的标准品稀释。标准品和质控无需稀释。

1.      取出所需用的板条，并做好标记。

2.      在相应孔中加入20μL标准品、质控及待测样本。

3.      每孔加入100μL检测缓冲液。

4.      以500-700 rpm的速度振荡，室温（~25℃）孵育1小时。

5.      用洗液洗板5次，每次30秒，洗完后在吸水材料上拍干。注意：强烈建议使用自动洗板机洗板。洗板不充分会影响实验的精确度。如没有自动洗板机，则按以下步骤洗板：(a)完全吸去孔内液体。(b)每孔加入0.4ml洗液。(c)再次吸去孔内液体。(d)重复步骤(b)和(c)4次。

6.      每孔加入100μL抗体-生物素结合物溶液。

7.      以500-700 rpm的速度振荡，室温（~25℃）孵育1小时。

8.      用洗液洗板5次，洗完后在吸水材料上拍干。

9.      每孔加入100μL酶结合物溶液。

10.    以500-700 rpm的速度振荡，室温（~25℃）孵育30分钟。

11.    用洗液洗板5次，洗完后在吸水材料上拍干。

12.    每孔加入100μLTMB底物溶液。

13.    以500-700 rpm的速度振荡，室温（~25℃）避光孵育10-15分钟。

14.    每孔加入100μl 终止液。

15.    30分钟内在波长450nm处测吸光度。

注：1)必须以0标准品作空白。2)如果能做到双波长测定，则设600或620nm为背景波长校正。

 

【结果计算】

A、  计算每一标准品、质控、待测样本各自的平均吸光度。

B、  在对数-对数或线性-线性坐标纸上，以每一标准品的平均吸光度为Y轴，浓度（ng/mL）为X轴作标准曲线。

C、  根据双孔的平均吸光度描绘最佳曲线。

D、  根据质控及待测样本各自的平均吸光度，从标准曲线上读出其相对应的浓度。

E、  浓度超过最高标准品浓度的样本应经0ng/mL的标准品稀释后重新实验。儿童的样本应按1：10用0ng/mL的标准品稀释。

F、  浓度低于最低标准品浓度的样本应如实报告。

如果样本的吸光度超出了酶标仪的范围，超出的部分应在405nm处第二次读数，再作一条标准曲线（如果能做到双波长测定，则设600或620nm为背景波长校正，方法同上），取值。未超出的部分仍以450nm的值为准。

 

【标准曲线示例】

孔号	孔内物质	平均吸光度	浓度（ng/mL）
A1, A2 B1, B2 C1, C2 D1, D2 E1, E2 F1, F2 G1, G2	标准品 A B C D E F G	0.03(空白) 0.01 0.02 0.06 0.39 1.50 3.13	0 0.05 0.10 0.25 1.8 7.5 15

 

【局限性】

l        本试剂盒提供的试剂用于测定血清中MIS/AMH的浓度。

l        避免反复冻融试剂和样本。

l        不宜使用溶血、黄疸或脂血性的样本。

l        实验结果应与病人的其他临床信息相结合进行综合分析。

 

【质量控制】

l        DSL质控和其他商业化质控都应在确定的可信限内。DSL质控的可信限打印在质控瓶标签上。

l        每一次实验都应该包括低浓度和高浓度的质控。

l        TMB底物溶液为无色，如果颜色变蓝说明溶液可能被污染或不稳定。

 

【灵敏度】

理论的灵敏度或最小检测值为0.006ng/mL。

 

注：本说明书仅供参考，以英文说明书为准。