液相色谱仪器常见参数之一泵和进样器

　　1)泵的相关问题：

　　①泵的结构和原理是什么

　　泵分为两类，恒流泵：柱阻力变化、流动相粘度变化、引起柱压变化而流量恒定，如往复柱塞泵。恒压泵：流量可随外界阻力变化而输出压力恒定，如装柱用的气动泵。HPLC 广泛采用往复柱塞泵，由液缸、柱塞、单向阀和驱动机构组成。泵流量不稳使保留变化，直接影响峰面积重现性和定量精度，使噪音变大，最小检测量变大。双柱塞泵流量平稳，输液精度高，流量精量+/- 0.1% ，流量准确度+/-1% 。双柱塞泵液缸容积很小(几微升~几百微升)适于梯度洗脱。为提供无脉动的准确流量，在输液系统中还需加一些辅助设备：过滤器、混合器、阻尼器、测压装置。

　　1.泵的构造和性能

　　②怎么才能辨别泵的好坏:

        输液泵是HPLC系统中最重要的部件之一。泵的性能好坏直接影响到整个系统的质量和分析结果的可靠性。好的输液泵应具备如下性能：a流量稳定，其RSD应<0.5%，这对定性定量的准确性至关重要;b流量范围宽，分析型应在0.1~10 ml/min范围内连续可调，制备型应能达到100 ml/min;c输出压力高，一般应能达到150~300kg/cm2;d液缸容积小;e密封性能好，耐腐蚀。

　　泵的种类很多，按输液性质可分为恒压泵和恒流泵。恒流泵按结构又可分为螺旋注射泵、柱塞往复泵和隔膜往复泵。恒压泵受柱阻影响，流量不稳定;螺旋泵缸体太大，这两种泵已被淘汰。目前应用最多的是柱塞往复泵。

　　柱塞往复泵的液缸容积小，可至0.1ml，因此易于清洗和更换流动相，特别适合于再循环和梯度洗脱;改变电机转速能方便地调节流量，流量不受柱阻影响;泵压可达400kg/cm2。其主要缺点是输出的脉冲性较大，现多采用双泵系统来克服。双泵按连接方式可分为并联式和串联式，一般说来并联泵的流量重现性较好(RSD为0.1%左右，串联泵为0.2~0.3%)，但出故障的机会较多(因多一单向阀)，价格也较贵。

　　各品牌输液泵的基本参数：

　　项目 Waters 515型 HP 1100型 LC-10ATvp型 Elite P200 II型 检定要求

　　流速范围 0.001~10 0.001~10 0.001~9.999 0.01~4.99

　　调节精度 0.001 0.001 0.001 0.01

　　流量精密度 RSD0.1% 0.15%(<0.3%) 0.3% 0.5% 1.5%

　　流量准确度 ±2.0% ±5.0% ±2.0%

　　最高压力 4000 Psi 40 MPa 39.2MPa 40.0MPa

　　密封圈寿命

　　流动相的脉冲 总结：辨别好坏的原则：

　　1.流量稳定性：可通过实验测定，稳定性越好，流量越准，说明泵越好;

　　2.脉冲大小：检查泵在工作时产生的脉冲，脉冲越小泵越好;

　　3.密封性：检查泵各处的密封性，密封性越好泵越好;

　　4.耐用性：这需要很长时间的一段运行才能看出，时间长而泵的性能变化越小，说明泵越好。

　　③泵的材质是什么：

        现在的泵一般是蠕动泵，材质各不相同，泵的最大耐压当然是越大越好.

　　阀体大多采用不锈钢，也有用金属钛的;阀座一般采用塑料或陶瓷;柱塞杆往往采用蓝宝石，其他材质如陶瓷，氧化锆等也有用。

　　④泵的最大耐压是多少?根据什么来计算的?psi是什么单位?压力越大越好吗?

　　PSI英文全称为Pounds per square inch。 P是磅pound,S是平方square,I是英寸inch,psi是压强的单位,即【磅力/平方英寸】 1psi=6.89475729kPa

　　耐压性以高纯水为流动相，堵死泵出口，压力保护设定为36MPa，泵停后记录泵压，10min后再次记录泵压，以泵压降低大小表示泵密封性好坏。

　　⑤“泵系统滞后体积

　　泵系统滞后体积

　　⑥流量范围是根据什么来的?越大越好?对分析物质有何影响?

　　流量范围是根据步电机的功率来计算。一般根据自己所需要来选择流量的范围。并不是越大越好。液相色谱泵以精度为最主要参数，流量范围小点也不怕，精度上不去，流量变化大，则严重影响分析物质的基线平稳和测定

　　⑦流量准度和精度一般各是多少?流量准度和精度越大越好吗?一般是什么范围?

　　准确度：以5次测定平均值与标称值的绝对误差表示

　　精密度：以5次测定的相对标准偏差表示

　　测试方法：连接一定的负载，在泵压>0.5MPa的恒压状态下，待流速稳定后，用称量瓶在流动相出口处接取一定的流动相，然后用天平称重，按温度校正后的流动相密度计算流动相体积，根据接取流动相的时间，计算流量。

　　流动相：高纯水

　　测试装置：秒表;万分之一的分析天平;精度为±0.1℃的温度计

　　流量 .................接取流动相的时间 ................. 测定次数

　　0.01ml/min ...........10min ........................... 5次

　　1.00ml/min ........... 1min ........................ 5次

　　5.0ml/min ............ 1min........................ 5次

　　⑧比例准度和比例精度是怎么计算的?数值是越大越好还是越小越好?有何意义?

　　1.比例准度和比例精度测试内容：

　　(1)准确度：以10次测定平均值与标称值的绝对误差表示

　　(2)精密度：以10次测定的相对标准偏差表示

　　2.测试方法：连接一定的负载，在泵压>0.5MPa的恒压状态下，待流速稳定后，使用精度为0.01mL/min的电子流量计测量标称值为0.1mL /min、1.0mL/min和5.0mL/min时的流量，每一分钟记录一次流量，记录10次，记录精确到0.01mL/min。

　　流动相：高纯水

　　附：实际工作中工程师在现场给用户安装时很少有配备电子流量计的，所以我们就拿容量瓶用减重法测定单位时间内(通常为10min)泵输送液体的质量。再测出测定时的环境温度，查出该温度下水的密度，用质量除以时间，除以密度求出实际流量，在进行计算。

　　我看过一本1997年出的实验标准(具体叫什么名字我不记得了)要求就是这么做的，要求测0.5mL/min、1.0mL/min、2.0mL/min三种流速下的准确度和精密度，三种流速要求测定的时间好像也不同，其中1.0的流速是要求每次10min。

　　我个人的观点是RSD不要大于3%就可以，大于3不太好，对结果的准确性评价有意义!

　　2.泵的使用和维护注意事项

　　为了延长泵的使用寿命和维持其输液的稳定性，必须按照下列注意事项进行操作：

　　①防止任何固体微粒进入泵体，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜(0.2μm或0.45μm)等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒(或片)。输液泵的滤器应经常清洗或更换。

　　②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂(对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水)。

　　③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转也会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。

　　④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。

　　⑤流动相应该先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性，如果有大量气泡，泵就无法正常工作。

　　如果输液泵产生故障，须查明原因，采取相应措施排除故障：

　　①没有流动相流出，又无压力指示。原因可能是泵内有大量气体，这时可打开泄压阀，使泵在较大流量(如5ml/min)下运转，将气泡排尽，也可用一个50ml针筒在泵出口处帮助抽出气体。另一个可能原因是密封环磨损，需更换。

　　②压力和流量不稳。原因可能是气泡，需要排除;或者是单向阀内有异物，可卸下单向阀，浸入丙酮内超声清洗。有时可能是砂滤棒内有气泡，或被盐的微细晶粒或滋生的微生物部分堵塞，这时，可卸下砂滤棒浸入流动相内超声除气泡，或将砂滤棒浸入稀酸(如4mol/L硝酸)内迅速除去微生物，或将盐溶解，再立即清洗。

　　③压力过高的原因是管路被堵塞，需要清除和清洗。压力降低的原因则可能是管路有泄漏。检查堵塞或泄漏时应逐段进行。

　　3.梯度洗脱

　　HPLC有等强度(isocratic)和梯度(gradient)洗脱两种方式。等度洗脱是在同一分析周期内流动相组成保持恒定，适合于组分数目较少，性质差别不大的样品。梯度洗脱是在一个分析周期内程序控制流动相的组成，如溶剂的极性、离子强度和pH值等，用于分析组分数目多、性质差异较大的复杂样品。采用梯度洗脱可以缩短分析时间，提高分离度，改善峰形，提高检测灵敏度，但是常常引起基线漂移和降低重现性。

　　梯度洗脱有两种实现方式：低压梯度(外梯度)和高压梯度(内梯度)。

　　两种溶剂组成的梯度洗脱可按任意程度混合，即有多种洗脱曲线：线性梯度、凹形梯度、凸形梯度和阶梯形梯度。线性梯度最常用，尤其适合于在反相柱上进行梯度洗脱。

　　在进行梯度洗脱时，由于多种溶剂混合，而且组成不断变化，因此带来一些特殊问题，必须充分重视：

　　①要注意溶剂的互溶性，不相混溶的溶剂不能用作梯度洗脱的流动相。有些溶剂在一定比例内混溶，超出范围后就不互溶，使用时更要引起注意。当有机溶剂和缓冲液混合时，还可能析出盐的晶体，尤其使用磷酸盐时需特别小心。

　　②梯度洗脱所用的溶剂纯度要求更高，以保证良好的重现性。进行样品分析前必须进行空白梯度洗脱，以辨认溶剂杂质峰，因为弱溶剂中的杂质富集在色谱柱头后会被强溶剂洗脱下来。用于梯度洗脱的溶剂需彻底脱气，以防止混合时产生气泡。

　　③混合溶剂的粘度常随组成而变化，因而在梯度洗脱时常出现压力的变化。例如甲醇和水粘度都较小，当二者以相近比例混合时粘度增大很多，此时的柱压大约是甲醇或水为流动相时的两倍。因此要注意防止梯度洗脱过程中压力超过输液泵或色谱柱能承受的最大压力。

　　④每次梯度洗脱之后必须对色谱柱进行再生处理，使其恢复到初始状态。需让10~30倍柱容积的初始流动相流经色谱柱，使固定相与初始流动相达到完全平衡。

　　进样器

　　①：六通阀进样器

　　六通阀进样器是高效液相色谱系统中最理想的进样器，它是由圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)组成。美国Rheodyne公司的六通阀进样器最为通用，各大HPLC仪器制造商均以此产品作为仪器的进样器。

　　工作原理：

　　1、手柄位进样(Load)位置时，样品经微量进样针从进样孔注射进定量环，定量环充满后，多余样品从放空孔排出;

　　2、将手柄转动至进样(Inject)位置时，阀与液相流路接通，由泵输送的流动相冲洗定量环，推动样品进入液相分析柱进行分析。

　　虽然六通阀进样器具有结构简单、使用方便、寿命长、日常无需维修等特点，但正确的使用和维护将能增加使用寿命，保护周边设备，同时增加分析准确度。如使用得当的话，六通阀进样器一般可连续进样3万次而无需维修。

　　以下浅谈有关六通阀进样器的使用及保养事宜(仅供参考)：

　　1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增，再转到进样位，过高的压力在柱头上引起损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。在HPLC系统中使用的注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。一方面，针头外侧紧贴进样器密封管内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气;另一方面，也防止了针头刺坏密封组件及定子。

　　2、六通阀进样器的进样方式有部分装液法和完全装液法两种。使用部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75%，如20gL的定量环最多进样15p,L的样品，并且要求每次进样体积准确、相同;使用完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20gL的定量环最少进样60至1001aL的样品，样才能完全置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用 100ul的平头进样针配合20ul满环进样。

　　3、可根据进样体积的需要自已制作定量环，一般不要求精确计算定量环的体积，譬如，一根名义上10gL的定量环，实际是9gL还是1lgL并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。

　　4、进样样品要求无微粒和能阻死针头及进样阀的物质，样品溶液均要用0.45~tm的滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。为防止缓冲盐和其它残留物质留在进样系统中，每次结束后应冲洗进样器，通常用不含盐的稀释剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗，再用无纤维纸擦净注射器针头的外侧。

　　②自动进样器与手动进样器谁的检测误差大?

　　③自动进样器和手动进样器的优点和缺点分别是什么?

　　②③的回答

　　自动进样器用六通进样阀作为进样阀,它包括圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)两部分.

　　定子连接到管路,样品环,进样孔以及其他外围部件,一般是用不锈钢或者陶瓷等耐磨材料制造.转子和

　　定子紧密结合,操作时可以转动,一般用较定子柔软的材料制成,如碳氟聚合物.自动进样器的转子是通

　　过电动马达带动的(有一些较老的型号使用压缩空气带动),而手动进样器则是在转子上连了一个手柄.

　　转子包括一些细小的刻槽用于连接到不同的定子位置.,定子和相关的连接在表示阀体的

　　圆圈以外,而转子的U形的连接通道被画在圆圈以内.转子处于load或fill位置,这时样品正在充入样品环,同时泵直接将流动相送入色谱柱;转子转至inject 位置,连接泵的通路和样品环连接,流动相将其中的样品冲入色谱柱.

　　完全装液法和部分装液法进样(Filled- and Partial-Loop Injection)

　　一般的六通进样阀都可以用完全装液或部分装液的方式进样.使用完全装液法(Filled-Loop)时进样体积取决于样品环的体积,图2a是这种方法的示意.例如,阀上装了20ul的样品环,样品被注入环中直到多余的样品从废液口排出,当转子转到inject位置时样品环中的样品就进入柱子.由于流体动力学的原因,分析者至少需要注入两倍于样品环体积的样品才能得到均匀的填充.如果要改变进样体积,就需要换上另一个不同体积的样品环.即将一定精确量的样品注入样品环中.例如,100ul样品环中可以只进20ul样品,然后,转子转动,样品被流动相冲入柱中.对于大多数进样器.最好能控制进样量少于样品环体积的一半.相对于完全装液法来说,这种技术的灵活性更高,因为分析者不需要更换样品环就可以进不同体积的样品.但这种技术需要进样器的取样体积有良好的精度和准度.

　　你是否注意到样品是被"反冲"(backflush)进入柱子的实际上样品从一个方向进入样品环,然后从相反的方向冲出样品环.反冲对于完全装液法的结果没有影响,但对部分装液法就非常重要了.考虑到有的自动进样器可能装了很大体积的样品环(比如1ml),如果分析者在1ml样品环中加入10ul样品,反冲进入柱,则样品就会以"液塞"的形式和样品环中其他物质(流动相)一起直接进入柱,这样就能得到良好的色谱结果;如果情况相反的话(图2b中泵和色谱柱互换位置),10ul的样品塞不得不流过1ml的管路, 这会造成样品带展宽,已经展宽的样品在分离过程中会进一步展宽,谱图中所有峰均会比预期的宽,等度分离时情况会更糟.因此反冲技术是很重要的进样技术.

　　手动进样器的工作方式就像图1和2中描述的,样品用进样针注入,转子用手转(或按下Inject键).

　　多数自动进样器设计是基于下列三种原理之一,样品被吸/推入样品环中或者进样针就是样品环的一部分.

　　A. 吸入式自动进样器 (Pull-to-Fill Autosampler)

　　这种自动进样器中样品是被注射器产生的吸力吸入样品环,早期这种设计因其简单可靠而非常流行,

　　后来随着另两种设计的出现而走向没落.图3a是其示意,此例中注射器连在废液排出口,采样针和相应

　　的管路连在进样口,针插入样品瓶中,接着注射器回吸直到样品完全充满样品环,转子旋转将样品进样. 这种设计非常简单,只有针沿一个轴运动(上/下),通过旋转样品盘将所需样品瓶置于针下.有一种简化设计更加简单--将一个密封的瓶盖压入瓶里以使样品进入样品环,取消了另一端的注射器.

　　如果简单是吸入式自动进样器的优点,那么浪费样品就是其缺点.像图3a所示,样品在进入样品环

　　之前,首先必须充满采样针和相连的管路,就造成10-100ul的样品被浪费,这种情况的影响取决于总的样品量.由于简单的设计,多数此类自动进样器都使用可旋转的样品盘按固定序列进样,同时需要在样品瓶之间放置一个清洗瓶或加装分离的清洗装置.

　　B. 推入式自动进样器 (Push-to-Fill Autosampler)

　　推入式设计的自动进样器更为常见,这种技术和手动进样极为相似.注射器移至样品瓶,吸入预定量

　　的样品,再移至进样口,将样品注入样品环,.这种设计需要的样品量远小于吸入式设计.注射器的吸取和排出都是在步进马达控制下完成的,可以达到很高的精密度和准确度,正常情况下完

　　全装液法和部分装液法的结果偏差都小于0.5%.

　　推入式自动进样器通常都在吸入式设计的基础上增加了一些功能,比如任意样品序列,更多的清洗功能,程控进样等.样品盘布局有圆形的,还有一种可以在样品瓶支架或96孔样品板上做三维运动的进样臂.这种自动进样器通常配有不同容量的样品环,最常见的是100-500ul.某些老式的自动进样器配备了5ml甚至是10ml的不可更换式样品环.

　　①泵的结构和原理是什么?

　　(hmzhou83):输液泵按输出液恒定的因素分恒压泵和恒流泵。对液相色谱分析来说，输液泵的流量稳定性更为重要，这是因为流速的变化会引起溶质的保留值的变化，而保留值是色谱定性的主要依据之一。因此，恒流泵的应用更广泛。

　　输液泵按工作方式分为气动泵和机械泵两大类。机械泵中又有螺旋传动注射泵、单活塞往复泵、双活塞往复泵和往复式隔膜泵。

　　(wangboxzzjs):HPLC使用的高压泵应满足下列条件：

　　a 流量恒定，无脉动，并有较大的调节范围(一般为1～10ml/min);

　　b 能抗溶剂腐蚀;

　　c 有较高的输液压力;对一般分离，60×105Pa的压力就满足了，对高效分离，要求达到150～300×105Pa。

　　(1)往复式柱塞泵

　　当柱塞推入缸体时，泵头出口(上部)的单向阀打开，同时，流动相进入的单向阀(下部)关闭，这时就输出少量的流体。反之，当柱塞向外拉时，流动相入口的单向阀打开，出口的单向阀同时关闭，一定量的流动相就由其储液器吸入缸体中。这种泵的特点是不受整个色谱体系中其余部分阻力稍有变化的影响，连续供给恒定体积的流动相。

　　(2)气动放大泵

　　其工作原理是：压力为p1的低压气体推动大面积(SA )活塞A，则在小面积(SB )活塞B输出压力增大至p2的液体。压力增大的倍数取决于A和B两活塞的面积比，如果A与B的面积之比为50：1 ，则压力为5×105Pa的气体就可得到压力为250×105Pa的输出液体。这是一种恒压泵。

　　(03yx2):高效液相色谱仪中的高压恒流泵必须能可靠的运转.但是要做到长时间低维护的可靠运转,就需要对泵有足够的了解,并注意与之有关的事项.目前作为商品出售的高压恒流泵多为往复式柱塞泵.凸轮与连杆将电机的圆周运动转变为柱塞杆的线性运动,在有单向阀的结构中,柱塞杆将常压下储液瓶中的流动相吸至泵腔后再送出,其耐压可达41MPa.通过改变凸轮的形状和电机的转速及柱塞杆的尺寸可以将流动相的脉动降至最小.如果对泵的各个部分都有清楚的认识,将来排出操作过程中出现的故障就很简单了.

　　泵头通常由两部分组成--单向阀和密封圈-柱塞杆.单向阀一般由阀体\塑料\或陶瓷阀座和红宝石球组成.在压力的作用下宝石球离开阀座,流动相流过单向阀; 反之,在反向力的作用下,宝石球回到阀座上,此时流动相不再流过单向阀.显然宝石球与阀座之间的配合必须非常适合才能防止流动相的泄漏.为了保证单向阀不发生泄漏,一些单向阀中安装了两套宝石球和阀座,也有一些单向阀是将宝石球用一个合适的弹簧压在阀座上.在不同的应用领域,单向阀阀体的材料有所不同,例如考虑生物兼容性的系统,单向阀的阀体往往采用金属钛,而不用不锈钢.为了降低成本和减少维护费用,一些生产厂商还采用了可置换式的卡套式塑料单元件,当然其功能仍保持不变.

　　②怎么才能辨别泵的好坏?

　　(wangboxzzjs):1.流量稳定性：可通过实验测定，稳定性越好，流量越准，说明泵越好;

　　2.脉冲大小：检查泵在工作时产生的脉冲，脉冲越小泵越好;

　　3.密封性：检查泵各处的密封性，密封性越好泵越好;

　　4.耐用性：这需要很长时间的一段运行才能看出，时间长而泵的性能变化越小，说明泵越好。

　　具体可参照以下方式进行：

　　一.流量：

　　1.测试内容：

　　(1)准确度：以5次测定平均值与标称值的绝对误差表示

　　(2)精密度：以5次测定的相对标准偏差表示

　　2.测试方法：连接一定的负载，在泵压>0.5MPa的恒压状态下，待流速稳定后，用称量瓶在流动相出口处接取一定的流动相，然后用天平称重，按温度校正后的流动相密度计算流动相体积，根据接取流动相的时间，计算流量。

　　流动相：高纯水

　　测试装置：秒表;万分之一的分析天平;精度为±0.1℃的温度计

　　流量 .................接取流动相的时间 ................. 测定次数

　　0.01ml/min ...........10min ........................... 5次

　　1.00ml/min ........... 1min ........................ 5次

　　5.0ml/min ............ 1min........................ 5次

　　二.压力：

　　1.耐压性(密封性)

　　以高纯水为流动相，堵死泵出口，压力保护设定为36MPa，泵停后记录泵压，10min后再次记录泵压，以泵压降低大小表示泵密封性好坏。

　　2.压力脉动(压力波动)

　　以高纯水为流动相，接色谱柱，调节流速，控制泵压恒定在10 MPa，待泵压稳定后，每分钟记录一次泵压值，共记录10次，以最大值和最小值之差表示压力脉动。

　　三.梯度：

　　1.准确度：以甲醇/水为流动相，在甲醇:水(体积比)为：10:90、50:50和

　　90:10时接取流动相，用空毛细管柱，GC-FID测定甲醇含量。

　　2.重复性：按照国家液相色谱仪计量检定规程(JJG 705-2002)进行。

　　3. 线性：当流动相：A为高纯水，B为含0.1%丙酮的水时，设定线性梯度：T=0时A=100%，B=0%;T=15min时，A=0%，B=100%(在流动相为A=100%，B=0%基线稳定后开始梯度)。用紫外检测器在210nm检测(保证响应信号不超过检测器的线性响应范围)，记录流动相变化时紫外吸收曲线。测试两次。

　　四.耐用性

　　测试方法：在接色谱柱的条件下，调节流速，控制泵压恒定在15 MPa;流动相：水：甲醇(70：30)，连续运行21天，流动相循环使用，每天用滤纸测试泵体可能有的泄漏，记录测试结果。

　　21天后停泵，做一次耐压测试(按照二. 1进行)

　　注释：

　　1.在测0.01ml/min流量时，接取流动相的时间较长，如水的挥发影响较大，可采用微量注射器直接接到流动相出口，用微量注射器直接测定体积。

　　2.在测试梯度准确度时，如发现用空毛细管柱，GC-FID测定甲醇含量的误差较大，不能满足梯度准确度时，可采用光度法与之比较。

　　3.厂家的泵在设计上如有特殊之处，在测试时需要采取一些特殊方法时，厂家可提出，与测试组协商解决。(

　　③泵的材质是什么?

　　(tlyb69):现在的泵一般是蠕动泵，材质各不相同，泵的最大耐压当然是越大越好.

　　(wangboxzzjs):阀体大多采用不锈钢，也有用金属钛的;阀座一般采用塑料或陶瓷;柱塞杆往往采用蓝宝石，其他材质如陶瓷，氧化锆等也有用。

　　④泵的最大耐压是多少?根据什么来计算的?psi是什么单位?压力越大越好吗?

　　(tlyb69):PSI英文全称为Pounds per square inch。 P是磅pound,S是平方square,I是英寸inch,psi是压强的单位,即【磅力/平方英寸】 1psi=6.89475729kPa

　　(wangboxzzjs):耐压性以高纯水为流动相，堵死泵出口，压力保护设定为36MPa，泵停后记录泵压，10min后再次记录泵压，以泵压降低大小表示泵密封性好坏。

　　⑤“泵系统滞后体积< p>

　　(tlyb69):泵系统滞后体积< p>

　　⑥流量范围是根据什么来的?越大越好?对分析物质有何影响?

　　(fde234)：流量范围是根据步电机的功率来计算。一般根据自己所需要来选择流量的范围。

　　(03yx2)：除了功率还和柱塞杆横切面大小，冲程速度有关。

　　⑦流量准度和精度一般各是多少?流量准度和精度越大越好吗?一般是什么范围?

　　(wangboxzzjs):(1)准确度：以5次测定平均值与标称值的绝对误差表示

　　(2)精密度：以5次测定的相对标准偏差表示

　　测试方法：连接一定的负载，在泵压>0.5MPa的恒压状态下，待流速稳定后，用称量瓶在流动相出口处接取一定的流动相，然后用天平称重，按温度校正后的流动相密度计算流动相体积，根据接取流动相的时间，计算流量。

　　流动相：高纯水

　　测试装置：秒表;万分之一的分析天平;精度为±0.1℃的温度计

　　流量 .................接取流动相的时间 ................. 测定次数

　　0.01ml/min ...........10min ........................... 5次

　　1.00ml/min ........... 1min ........................ 5次

　　5.0ml/min ............ 1min........................ 5次

　　⑧比例准度和比例精度是怎么计算的?数值是越大越好还是越小越好?有何意义?

　　①自动进样器的结构是什么?

　　(0205100221):我用过的是waters-uplc 主要组成部分：自动清洗系统，进样内外针及送样系统，定量环及六通阀，样品区定位装置等等;

　　(melu): 自动进样器用六通进样阀作为进样阀,它包括圆形密封垫(转子)和固定底座(定子)两部分. 定子连接到管路,样品环,进样孔以及其他外围部件,一般是用不锈钢或者陶瓷等耐磨材料制造.转子和定子紧密结合,操作时可以转动,一般用较定子柔软的材料制成,如碳氟聚合物.自动进样器的转子是通过电动马达带动的(有一些较老的型号使用压缩空气带动),而手动进样器则是在转子上连了一个手柄.转子包括一些细小的刻槽用于连接到不同的定子位置.,定子和相关的连接在表示阀体的圆圈以外,而转子的U形的连接通道被画在圆圈以内.转子处于load或fill位置,这时样品正在充入样品环,同时泵直接将流动相送入色谱柱;转子转至inject 位置,连接泵的通路和样品环连接,流动相将其中的样品冲入色谱柱.

　　主要包括:A. 吸入式自动进样器 (Pull-to-Fill Autosampler)

　　这种自动进样器中样品是被注射器产生的吸力吸入样品环,早期这种设计因其简单可靠而非常流行,后来随着另两种设计的出现而走向没落.图3a是其示意,此例中注射器连在废液排出口,采样针和相应的管路连在进样口,针插入样品瓶中,接着注射器回吸直到样品完全充满样品环,转子旋转将样品进样. 这种设计非常简单,只有针沿一个轴运动(上/下),通过旋转样品盘将所需样品瓶置于针下.有一种简化设计更加简单--将一个密封的瓶盖压入瓶里以使样品进入样品环,取消了另一端的注射器.如果简单是吸入式自动进样器的优点,那么浪费样品就是其缺点.像图 3a所示,样品在进入样品环之前,首先必须充满采样针和相连的管路,就造成10-100ul的样品被浪费,这种情况的影响取决于总的样品量.由于简单的设计,多数此类自动进样器都使用可旋转的样品盘按固定序列进样,同时需要在样品瓶之间放置一个清洗瓶或加装分离的清洗装置.

　　B. 推入式自动进样器 (Push-to-Fill Autosampler)

　　推入式设计的自动进样器更为常见,这种技术和手动进样极为相似.注射器移至样品瓶,吸入预定量的样品,再移至进样口,将样品注入样品环,.这种设计需要的样品量远小于吸入式设计.注射器的吸取和排出都是在步进马达控制下完成的,可以达到很高的精密度和准确度,正常情况下完全装液法和部分装液法的结果偏差都小于0.5%.推入式自动进样器通常都在吸入式设计的基础上增加了一些功能,比如任意样品序列,更多的清洗功能,程控进样等.样品盘布局有圆形的,还有一种可以在样品瓶支架或96孔样品板上做三维运动的进样臂.这种自动进样器通常配有不同容量的样品环,最常见的是100-500ul.某些老式的自动进样器配备了5ml甚至是10ml的不可更换式样品环.

　　C. 整体样品环自动进样器 (Integral-Loop Autosampler)

　　近几年整体样品环自动进样器变得流行起来,这种设计的优点在于没有样品的浪费,尤其适于样品量有限的痕量分析.整体样品环自动进样器的运转过程比较复杂,自动进样器处于清洗状态,根据设计的不同清洗液被吸入,排出样品环或二者均有,这时针被固定在高压密封圈内;图4b表示针移至样品瓶内,样品被吸入样品环;最后针又插入高压密封圈内,转子转至进样位置(图4c).由于样品只存在于清洗过的样品环内,所以全部样品都被进样,不会造成浪费.最大进样体积则取决于样品环容量,但这种样品环很难更换.典型的整体样品环自动进样器的最大进样体积是100ul.

　　整体样品环式设计

　　a:针和样品环清洗

　　b:样品环充液

　　c:进样

　　②自动进样器与手动进样器谁的检测误差大?

　　(0205100221):看情况了。完全进样情况下，误差差不多;部分进样时，差别较大，此时操作人员造成误差。

　　③自动进样器和手动进样器的优点和缺点分别是什么?

　　(0205100221):自动进样器主要缺点：价格昂贵，一旦损害，修复价格也昂贵!上次样品区定位小车坏了，针也弯了，就花费20000元维修!手动进样主要缺点：工作人员不能腾出时间进行其它实验!

　　(hmzhou83):进样器是个六通阀.手动进样器就是个比较简单的装置，直接用手扳,自动的比较复杂，需要自动手臂，手臂位置定位，计量泵(用于吸取量的多少)，驱动装置(用于驱动六通阀)，真正进样装置：六通阀。

　　(duliuhui):自动进样的优点：定量误差小，重复性好，设定程序后自动运行可节省大量人力资源(尤其对于大批量样品检测)。

　　自动进样缺点：价格昂贵，结构复杂，维护要求高，维修成本高。手动进样的人为因素较多，定量误差和重复性要差一些(部分进样法);价格相对便宜，易于维护和修理。