人脂联素(Adiponectin and gAcrp30)试剂盒

上一篇 / 下一篇 2009-12-25 13:04:54/ 个人分类：产品

人脂联素定量ELISA试剂盒说明书

脂联素在肥胖症患者和II型糖尿病患者血清中的浓度明显低于非肥胖者，其浓度的降低导致了胰岛素抵抗和高胰岛素血症，而脂联素有防止动脉粥样硬化斑块形成的作用，因此脂联素与肥胖症患者II型糖尿病及冠心病的发生发展密切相关,即脂联素的明显降低预示着II型糖尿病及冠心病的发生明显增加。在国外脂联素是近二年肥胖症的研究的一大热点。本试剂盒采用双抗夹心法测定人血浆或血清中的脂联素，包被抗体及检测抗体采用鼠抗人脂联素单克隆抗体，用生物素、亲和素辣根酶标记检测系统，测定人血清或血浆中的脂联素。

试剂组成

1．预包被板 12x8孔

2．样品液 40mlx2

3．标准品A 3ngx1

4．10x清洗液 30mlx2 (用前加蒸馏水270mlx2)

5．检测抗体 12mlx1

6．酶结合物 12mlx1

7．显色液A 6.5mlx1

8．显色液B 6.5mlx1

9．终止液 12mlx1

10．说明书 1份

操作程序

(恒温箱温育，微孔板直接放入箱内；水浴锅温育，微孔板放入温育盒内，盒内温度应达37℃)

1．标本：待测定的血标本，应立即离心分离出血浆(EDTA或肝素抗凝)或血清，测定前存于—80℃。

2．取出与待测定样品相应量的板孔标记。其余板放回装有干燥剂的原包装袋里。

3．标本稀释：取待测标本10ul+样品液90ul混匀（样品I），取样品I 10ul+样品液90ul混匀（样品Ⅱ），取样品II 10ul+样品液490ul混匀（样品Ⅲ）。

4．标准品配制：取标准品1支加入500ul样品液,混匀（A：6ng/ml），取1ml小离心管7支（B、C、D、E、F、G、H），分别加入250ul样品液，H管为零对照管，从A管吸取250ul加入B管，混匀（B：3ng/ml）依次倍比稀释至G管（C：1.5ng/ml,D：0.75ng/ml，E：0.38ng/ml，F：0.19ng/ml,G：0.10 ng/ml）

5．加样：每孔加100ul已1;5000稀释的样品Ⅲ，各标准品每孔加100ul，做复孔，空白孔不加样，37℃1.5小时。

6．洗板：300ul/孔1x清洗液,甩去,在干净的吸水纸上拍干。如此洗三遍。

7．加检测抗体：100ul/孔，37℃1.5小时。洗板同6，洗三遍。

8．加酶结合物：100ul/孔，37℃30分钟。洗板同6，洗四遍。

9．显色：显色液A 50ul/孔，显色液B 50ul/孔（先加A液再加B液，不得先加B液，也可等量的A液与B液混合，100ul/孔），37℃ 15分钟（从加B液算时间）。

10．终止：终止液100ul/孔，按显色液加样顺序加样。

11. 测定450nm 的OD 值（用OD540或570校正），减去空白孔。用 OD值对已知浓度的标准品作图，测定样品浓度。样品脂联素的浓度应乘上样品的稀释倍数5000。样品若不在线性范围，可对稀释度进行调整。

技术指标

1. 灵敏度高，100pg/ml；

2. 特异性强，不与小鼠及其它动物源脂联素交叉；

3. 线性范围：100pg/ml – 6ng/ml，结果重复可靠。

注意事项