中药治疗肝癌的生物学效应

上一篇 / 下一篇 2010-03-26 15:35:41

　　我们曾经对中药治疗肝癌前病变做了一些研究[1]，为了探索其疗效机制，设计进一步的实验研究，特将中药治疗肝癌的生物学效应综述如下。

　　一、诱导肿瘤细胞凋亡

　　凋亡是在生理或病理条件下，被受体介导过程诱导而且在生长调节信号的控制下发生的单个细胞的死亡，是机体主动清除无用或有害细胞的过程，也是组织在癌症发展的不同阶段，通过抑制每个癌细胞的生存性和控制它们的生长数量的一种先天性抗癌机制[2]。朱秀琴[3]观察了中药阿魏酸钠(SF)对EBL-7404肝癌细胞生存性及细胞凋亡的影响，他们用4种浓度的SF培养液作用于细胞，其中lg/L，0.lg/L和 0.01g/L组吸光度与对照组比较有明显差异，提示SF抑制了人EBL-7404肝癌细胞的生存性;以含SF终浓度为lg/L的培养液温育细胞48h 后，SF组的琼脂糖凝胶电泳呈梯形表达，提示SF诱导了人EBL-7404肝癌细胞的凋亡。王昌俊等[4]研究了中药960(由莪术、白术、苦参、白花蛇舌草等组成)对人肝癌细胞凋亡的诱导作用，结果经960药物血清处理后，肿瘤细胞皱缩、深染：AO染色，细胞呈致密浓染的黄绿色荧光;DNA电泳见典型“梯形”带;DNA直方图上见典型凋亡峰(0.95%~27.77%)，标记率64.12%~70.02%。周振华等[5]研究了健脾益气方(由党参、白术、茯苓、八月扎等组成)对小鼠HAC肝癌细胞凋亡和bax基因表达的影响，结果实验组凋亡指数较对照组明显升高(P<0.01)，电镜证实凋亡细胞发生特征性形态学改变，其bax基因蛋白呈强阳性表达，而对照组无阳性表达;并且，中药组瘤重均低于对照组，抑瘤率为41.6。杨勤建等[6]对892号药液诱导人肝癌细胞凋亡进行了初步研究，发现人肝癌细胞株BeL-7402经含中药血清孵育处理后，由贴壁生长而逐渐脱落，外形变圆，体积缩小，折光性增强;荧光镜下见细胞核破碎，裂解为大小不等的凋亡小体。

　　二、抑制DNA，RNA合成

　　吴万垠等[7]用莪术油进行小鼠肝癌HepA抑制实验，以病理细胞图象分析仪分析莪术油对小鼠细胞DNA含量的影响，结果其抑瘤率明显高于对照组(P<0.01)，能显著降低小鼠肝癌细胞的DNA光密度值、核而积及DNA指数、同时能提高肝癌细胞中二倍体细胞的比例，降低超五倍体细胞比例，提示其抗癌活性与抑制肿瘤细胞DNA合成有关。闫志勇等[8]观察了癌肿宁对荷瘤肝癌(H22)小鼠的肿瘤细胞周期的影响，经流式细胞术分析发现，癌肿宁高、低剂量组的S期肿瘤细胞较模型组为高，而G0和M期明显少于模型组，表明癌肿宁可影响肿瘤细胞周期从S期向G2期和M期的转变过程，将细胞阻滞在S期，从而抑制肿瘤细胞的增殖。王薇等[9]进行了红景天素对人肝癌细胞影响的实验研究，发现红景天素能抑制体外肝癌细胞(7721，H22)于S期(DNA合成期)，降低DNA合成，增高糖原含量，提高荷瘤小鼠生存质量和延长生存期。徐朝晖等[10]研究了金针菇多搪对体外培养的人肝癌SMMC-7721细胞生长曲线、有丝分裂指数及线粒体活性的影响，结果提示金针菇多糖能干扰人肝癌细胞的细胞周期，使细胞分裂减少，细胞增殖降低。王修杰等[11]通过Brdu动物体内标记，用Brdu单克隆抗体检测肿瘤组织中的Brdu标记细胞，结果经764复方(含党参、白花蛇舌草、花粉、大青叶等)治疗后的荷肝癌(H22)小鼠，其平均瘤重和肿瘤组织Brdu标记细胞显著低于对照组;用PC10单克隆抗体免疫组化检测的PCNA(增殖细胞核抗原)阳性细胞为G。晚期和S早期细胞，用中药764复方治疗后，肿瘤组织中G，晚期和S早期细胞降低，肿瘤细胞增殖活性下降。

　　三、诱导肝瘤细胞分化

　　张建军等[12]，观察了富硒珍珠茶(苦味叶下珠、富硒茶等)药物血清对人肝癌细胞株的诱导分化作用，发现药物血清能明显抑制肿瘤细胞的生长和克隆，减少AFP和Y-GT的合成和分泌，促进白蛋白的合成和分泌，呈现浓度、时间依赖关系。张燕军等[13]研究了苦参碱对SMMC-7721细胞系的诱导分化作用，其可抑制人肝酒细胞系SMMC-7721增殖，亚细胞结构趋于正常，苦参碱组细胞AFP分泌量明显低于对照组，γ-GT活力逐日下降，TAT活力始终高于对照组，细胞DNA含量降低，S期细胞数增加，诱导其向正常肝细胞分化。周建锋等[14]研究了不同治则中药诱导SMMC-7721人肝癌细胞分化的作用，结果表明：①养阴法(北沙参、天冬)显著抑制细胞增殖及其AFP分泌;②益气(黄芪、白术)养阴、温阳(附子、肉桂)养阴及补肾(虫草菌丝、仙灵脾)养阴等3组药物血清的白蛋白分泌量均显著高于养阴组;③单纯益气组药物血清显著降低细胞内 cAMP含量。而益气养阴组细胞内的cAMP含量为单纯益气组的4倍，较养阴组也提高了64.3%。提示各种治法均具有诱导肝癌细胞分化的作用，养阴与益气法具有明显的协同作用。

　　四、调节细胞免疫功能

　　闫志勇等[8，15]观察了癌肿宁对荷肝癌(H22)小鼠的抑瘤作用及其对IL-2和NK细胞活性的影响，发现癌肿宁具有明显的抑瘤作用，并能显著提高IL-2和NK细胞活性。他还发现癌肿宁可显著提高荷瘤机体肿瘤细胞细胞免疫功能，其高、低剂量组的3个肿瘤红细胞花环率(ETER，ATER，DTER)均显著高于模型组和阳性对照组，接近于正常组。宋卫生等[16，17]研究了中华麦饭石对肝癌大鼠免疫功能的影响，发现它能够提高大鼠机体的IL-2活性和淋巴细胞转化率，从而减少了大鼠肝癌的发生。廖恒祥等[18]观察了丹参对犬原位肝脏灌注区域性化疗所致细胞免疫抑制的防护作用。结果提示，用药组动物细胞免疫功能(T，B细胞及吞噬细胞功能、淋巴细胞转换率等)明显高于化疗组。韩克起等[19]研究了扶正抗癌方(西洋参、白术、穿山甲、鳖甲、急性子、漏芦、核桃树枝)对大鼠移植性肝癌的红细胞粘附功能及IL-2水平的影响，结果表明，扶正抗癌方能显著提高RBC-C，}RR，降低RBC-ICRR，促进IL-2产生。陈飞松等[20]研究了芪龙方(由黄芪、龙葵、党参、黄芩、丹参、赤芍、甘草等组成)对荷瘤小鼠T细胞亚群和自然杀伤细胞的作用，结果给药第7，13d，芪龙组CD4数量明显上升。自然杀伤(NK)细胞活性明显升高(均P<0.05)。其抑瘤作用分别为25.0%，40.5%。叶嗣颖等[21]采用125I- UdR释放法研究了绿舒筋对实体型肝癌小鼠脾NK细胞活性的调节作用，发现一定剂量的绿舒筋注射液可以显著增强NK细胞活性，并延长小鼠生存期。钱氏报道升惹燮理合剂(升麻、黄芪、该仁等)能加强NK细胞的杀伤活性，活化T细胞产生IL-2外，还可加强外周血淋巴细胞与肿瘤组织内浸润的淋巴细胞的特异性杀伤力[22]。

　　五、逆转肿瘤细胞多药耐药性

　　肿瘤细胞对抗抗疮药物而产生多药耐药性，是肿瘤化疗失败的主要原因。自从报道异搏定具有逆转肿瘤细胞耐药性以来，相继发现了多种化学增敏剂，但因其严重的毒副反应而使临床应用受到限制。李大成等[23]通过体外细胞实验，从32种中药制剂筛选出了3种中药逆转剂：Ams-11，Fw-13和Tul-17，它们能明显增强多药耐药细胞对抗癌药物的敏感性，其逆转作用呈剂量依赖关系。胡凯文等[24]以两种不同的多药耐药瘤株为研究对象，对多种中药活性成分进行了体外细胞杀伤实验和耐药逆转研究，结果表明，皂甙类在常规剂量下对耐药和敏感细胞均没有杀伤作用，其中大多数不具备耐药逆转活性，少数具有低活性;大黄葱配类对耐药和敏感细胞均有很强的杀伤作用，而且似乎对耐药细胞的作用更强，也不具备耐药逆转活性;生物碱类普遍对耐药细胞生长有轻度抑制作用，并首次发现田体类生物碱PM和PM，对耐药细胞有明显逆转作用。

　　六、破坏肿翻血管

　　对晚期肝癌使用中药局部介人治疗，可以通过破坏血液供应而达到抗肿瘤作用，常用的中药有华蟾索针剂、鸦胆子乳剂、莪术油、白芨油、喜树碱及中药复方针剂等，可用于肝动脉灌注、栓塞和瘤内注射[25]。同济医科大学协和医院冯敢生等报道，在常规化疗基础上，分别用白发粉与明胶海绵作肝动脉栓塞，治疗肝癌101例，结果：白友组56例，存活时间12个月以上81.9%，24个月以上44.9%，36个月以上33.9，平均生存19.8个月;明胶海绵组45例，分别为48.9%，31.1%，16.0%，平均生存15.7个月，有显著差异。认为：①白芨粉作为血管栓塞剂治疗肝癌，具有永久性栓塞效果，除机械性阻塞外，还具有强烈的促凝血作用;②由于白芨粉可根据需要配成合适浓度，既能堵塞动脉主干，又可利用其胶质堵塞未被碘油充填的肿瘤血管床.阻断侧支血供的建立;③从碘油聚合排空来看，白芨组优于明胶组。故可减少栓塞治疗失败。类似临床报道已有不少，而且在人体治疗前已作过相应的动物试验。例如，曾晓华对15只实验犬通过股动脉插至肝总动脉灌注鸦胆子油与碘化油混合乳化剂，病理结果显示，鸦胆子油对正常犬肝细胞有一定的毁损毒力，可能在肝癌介人治疗中起重要作用。范建等用乳化聚合法制备华蟾酥精明胶微球对大鼠进行肝动脉栓塞，实验结果提示，华蟾酥精有较好的抗肝癌作用，由于其强烈的致血管炎效应，可使被栓塞血管产生血管炎和继发性栓塞，加强栓塞效果;药物微球可在肝内定位缓释，在栓塞的同时充当药库，使局部保持较高的药物浓度，降低毒副作用。董生等用经基喜树碱明胶海绵微球(OPT-ms)，经肝动脉注人大鼠移植性肝癌中，与生理盐水组比较，其肿瘤坏死彻底而广泛，动物生存期明显延长(P<0.001)，而常规OPT、空白明胶微球治疗的大鼠，虽然肿瘤生长受到抑制，肿瘤组织发生不同程度的坏死，但生存期未明显延长。

　　七、反突变作用

　　从肿瘤形成的角度看，致癌和致突变关系密切。陈永培等[zs]用鼠伤寒沙门氏回复突变(Ames)实验平板掺人法对临床常用的75种抗肿瘤中草药进行抗突变研究，结果：椿根皮、土鳖虫、王不留行、草河车和蜈蚣等有抗移码型基因突变作用，石菖蒲、艾草、半夏和虎杖有抗置换型基因突变作用。Wong BYY等[27]以TA100(碱基替换型突变株)为试验菌株，小鼠肝脏S9上清液为代谢激活系统，研究了4种中药对苯并芘(BaP)诱变及[3H]BaP与小牛胸腺DNA结合形成BaP-DNA复合体的抑制作用，经检测，4种中药的水提取物均有明显的浓度依赖性抑制作用，趋势为半枝莲>女贞子>白花蛇舌草>膜荚黄芪。

　　史桂芝[28]研究了甘草、白屈菜对AFB，致突变的阻断作用，Ames试验结果表明，甘草在25mg/rnl，50mg/ml，100mg/ml，200mg/ml时，对AFB诱发的TA97、TA98、TA100、TA102菌株突变的阻断率分别为53.4%~83.6%，49.8%~76.1%，71.3%~79.8%和15.9%~54.9%;白屈菜的阻断率为62.6%~89.600，28.2%~72.3%，59.0%~ 69.4%和32.2%~54.9%。

　　此外，吴万垠等[29]研究了健脾益气合剂(党参、白术、袂等、八月扎等)阻抑小鼠HBV协同AFB1致肝癌的机制，他们将HBV转基因小鼠暴露于AFB1，中以观察中药对其AFB1-DNA加成物的含量，以及与AFB1代谢有关的两种酶的活性的影响，结果健脾益气合剂能使小鼠暴露AFB1后1h及24h时升高的肝脏AFB1-DNA加成物水平降至近正常水平，并能提高小鼠肝脏P450、谷肤甘肚含量及激活GST活性。韩克起等[30]研究了扶正抗癌方对大鼠移植性肝癌的抗肿瘤及抗脂质过氧化作用，结果表明，扶正抗癌方具有明显的缩小肿瘤和延长荷瘤鼠生存时间的作用，并能提高荷瘤鼠红细胞SOD酶活性，降低MDA含量，提示其抗肿瘤作用与抗脂质过氧化作用有关。

　　参考文献

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　　3 朱秀琴，王国申，张学军，等. 中药阿魏酸钠对EBL-7404肝痛细胞生存性及凋亡的影响.世界华人消化杂志，1999，7(8)：715

　　4 王昌俊，陈伟，钱伯文.中药960诱导人肝癌细胞凋亡的研究.中西医结合肝病杂志2000，10(1)：19

　　5 周振华，宋时志，于尔辛，等. 健脾益气方对小鼠HAC肝癌细胞凋亡和bax基因表达影响的实验研究. 中国中西医结合脾胃杂志，2000，8(2)：78

　　6 杨勤建，涂晋文. 892号药液诱导人肝癌细胞凋亡的初步研究. 中西医结合肝病杂志，1998，8(3)：159

　　7 吴万垠，罗石坚，程剑华，等. 教术油对小鼠细胞DNA作用的图象分析.中西医结合肝病杂志.1999，9(1)：18

　　8 闫志勇，张天娥，杨彦，等. 癌肿宁对荷实体瘤肝166(H22)小鼠肿瘤红细胞免疫和肿瘤细胞周期的影响.中国中西医结合脾胃杂志，2000，8(1)：17

　　9 王薇，关桂梅，盂晓婷，等. 红景天素对人肝店细启影响的实脸研究.白求思医科大学学报，1997，23(1)s 20

　　10 徐朝晖，姜世明，王俊茹. 金针菇子实体多枯提取物对人肝启SMMC-7721细胞的抑制增殖作用，1997， 23 CI)s 20

　　11 王修杰，王朝俊，谭厚生. 764复方抗播作用及其机理的实脸研究. 癌症，1997，16(3)：183