流式细胞术(FCM)简介

上一篇 / 下一篇  2010-04-07 14:26:39/ 个人分类:流式细胞仪

  流式细胞仪是测量染色细胞标记物荧光强度的细胞分析仪,广泛应用于基础临床研究和临床实践各个方面, 希望我们的工作能给您的科研和临床诊治带来一定的帮助, 也希望您能给与我们的工作一定的支持!检测项目有:1,淋巴细胞亚群 2,HLA-B27 3,白血病免役分型 4,DNA倍体分析 5,血小板活化

  1, 淋巴细胞亚群(NK, CD19, CD3, CD4, CD8):即人体的免役功能,那么,什么是免役呢?通俗的讲就是识别自身与非自身成分的生理功能。人体通过免役系统之间的相互调节而保持平衡,是多系统共同参与的复杂过程。人体免役功能表现为:1,对外来病原微生物及毒素的免役防御;2,机体不断的清除衰老细胞的免役自稳;3,抗肿瘤等的免役监视。在这里主要谈论一下免役防御,即抗感染免役。抗感染,清除非己成分是机体免役系统最基本的功能之一。实际上,感染的结局与微生物的种类、侵入途径、数量及寄生的部位有关,但更重要的是取决于机体免役系统的功能状态。而免役系统在免役应答过程中起核心作用的是淋巴细胞。淋巴细胞根据其生物功能和细胞抗原的表达可以分为三大类:B细胞、T细胞和NK细胞。

  NK细胞,即自然杀伤细胞,在抗病毒免役中发挥着重要的作用,当病毒感染后,在免役监视中起重要作用的NK细胞首先反应,一方面,NK细胞产生的细胞因子如IFN-r等对机体免役功能进行调节。同时也是评估人体非特异性免役状态的有用指标,其意义相当于补体系统的检测,尤其是病毒感染和肿瘤中。

  T(CD3+)淋巴细胞主要参与细胞免役,根据其不同的功能特性分为辅助/诱导T淋巴细胞(+彻底)和抑制/细胞毒T淋巴细胞(CD8+)。CD4+能促进B细胞T细胞和其他免役细胞的增殖与分化,协调免疫细胞间相互作用;CD8+代表抑制性T细胞和杀伤性T细胞。抑制性T细胞为协调性T细胞,杀伤性T细胞主要识别存在于靶细胞表面上的MHC—1类分子与抗原结合的复合物,如被病毒感染的靶细胞或癌细胞等,因此于抗病毒抗肿瘤免疫有关。

  B淋巴细胞主要参与体液免疫。正常人体内,淋巴细胞极其亚群保持着一定的平衡,并相互协调,以发挥各自的作用。如果说抗感染免疫中以何种免疫为主,则因感染的微生物而异。一般来说,抗体不易进入细胞内,只能对胞外感染的病原微生物起作用,所以体液免疫在胞外感染中起重要作用,而消灭胞内病原体主要靠细胞免疫发挥作用。

  以前,绝大多数医院只有体液免疫的一些常规项目开展,无法了解整体的免疫状态。但随着科技的发展,尤其流式细胞仪投入临床应用以来,淋巴细胞亚群及各种细胞因子检测项目的发展迅速,为我们提供了新的临床诊断学的常规模式,即临床医生在获得每一个病人免疫状态的客观评估后,“祛邪与扶正”相结合的综合治疗将安排更加合理,更加有的放矢。

  检测项目有:CD19、CD3、CD4、CD8、NK细胞检测和CD4/CD8的比值,因CD4和CD8这两组细胞在T细胞网络中处于调节枢纽位置。在许多病理情况下其数量和比值可以发生变化,其变化不但反映T细胞棉衣功能也间接反映了体液免疫状况。济南市中心医院中心实验室流式项目开展工作近三年来,检测的千余例标本也验证着并促进着临床免疫学的发展。

  在国内,临床上长为慢性感染、反复感染、不常见的病原体感染、感染期不完全清楚或对症治疗不完全应答的病人做全套的淋巴细胞亚群,也应用于肿瘤病人、移植病人和和风湿病人的诊断及疗效的判定。

  国际上,淋巴细胞及其亚群即上述最为成熟的一组项目是人体免疫监控指标,是美国FDA认证的健康项目查体之一,从而为人们了解自身免疫状态和抵御疾病增添了新的途径。

  标本: 肝素钠或EDTA抗凝的全血

  2.HLA—B27

  强直性脊柱炎(ANKY LOSING SPONDY LITIS,AS)是目前已知与HLA 有强关联的一种疾病。在过去的20年中,大量不典型AS通过HLA—B27检测而证实,HLA—B27已列入有价值的临床诊断工具,由于方法学因素,该检测技术未得到扩大。鉴于HLA—B27检测对众多脊柱关节病的诊断有举足轻重的作用,因此方法学的选择就显得尤为重要。

  常规检测HLA—B27的方法是由TEARSKI和MCCLELLAND提出的微量细胞淋巴毒实验。其基本原理是:标准抗血清中含有细胞毒抗体,与待测细胞表面相应的HLA抗原结合,激活随后加入的补体,使细胞损伤或裂解,再利用染料排斥实验,通过显微镜判断受检细胞的活性。整个实验过程时间长,劳动强度大,且由于抗血清是由经产妇提供的的多克隆抗体,因此其灵敏度和特异性都很难达到100%,此外还需专门的技术人员来解释实验结果,因而普及困难。

  单克隆抗体和荧光素的开发使的流式细胞术在各个领域得到空前的发展,多参数同时测定使得流式细胞数得以快速、灵敏、特意地测定某一特定细胞群中的某一特定抗原的表达。与传统方法相比,流式细胞数来检测HLA—B27的表达,无须分离淋巴细胞、操作简单、自动化程度高、灵敏度达100%、特意性达97.4%、结果稳定、样本之间、不同仪器之间、不同实验室之间可重复性高。

  科技的发展使我们在应用流式细胞数测HLA—B27的基础上又有新的飞跃,HLA—B27试剂盒与HLA—B27自动软件配套使用,为我们提供了一种快速、准确的检测病人T淋巴细胞表面的HLA—B27抗原表达的方法。试剂盒中的单克隆抗体不仅可于所有已知的HLA—B27亚型结合,还会于HLA—B27发生交叉反映,少数情况下与它HLA—B等位基因的产物也能结合。由于T细胞只表达HLA—1类抗原,所以通过分析T淋巴细胞上的抗HLA—B27FITC平均荧光强度就能最大限度地减少检测的假阳性,将HLA—B27或其它交叉反应阳性而HLA—B27阴性的样本与确实表达HLA——B27的样本区别开来。

  标本: 肝素钠或EDTA抗凝的全血

  3白血病免疫分型

  形态学分型是白血病分型的的基础,白血病免疫分型是白血病分型的的重要补充和进一步深化,国际白血病MIC分型协作组认为免疫分型对每一例急性白血病都是必不可少的对下列情况意义更大:1.形态学,细胞学染色不能肯定细胞来源的白血病。2.形态学为急性淋巴细胞白血病或急性未分化白血病但缺乏特异性淋巴细胞系列抗原标记。3.混合性白血病。4.部分髓系白血病。5.慢性淋巴细胞白血病。

  标本: 肝素钠或EDTA抗凝的全血或骨髓

  4. DNA倍体分析

  DNA非整倍体的出现可能是癌前病变发生早期癌变的一个重要指标, DNA倍体分析结合临床病理的形态学诊断,可对一些不易被早期发现的恶性肿瘤进行早期诊断,跟踪随访和早期治疗,进而大大提高了一些肿瘤的治愈率和生存率,尤其是对一些细胞抽吸物,体液,组织液懂得脱落细胞进行DNA倍体分析,意义更加重大,与正常组织细胞相对的DNA含量有5%的变化就可以被流式细胞仪很清晰地分辨出,而此时,形态学往往还没有明显的变异。FCM可以提供确切的诊断信息, 流式细胞术对于淋巴瘤的早期诊断具有比形态学更为敏感, 准确的优点。 形态学表现为良性肿瘤, 出现非整被体提示有恶性转变的可能; DNA指数可作为判断间叶组织肿瘤良恶性的辅助指标。

  标本: 肝素钠或EDTA抗凝的全血, 体液, 组织灌洗液

  5.血小板活化

  流式细胞仪检测血小板活化采用全血标本, 因全血标本中的血小板更接近生理状态, 操作简单, 减少由于操作造成的血小板状态改变(如血小板活化), 同时检测血小板的多个标志物, 结合FSC和SSC, 评估多个参数, 进行定量分析, 多采用血小板特异抗体CD41或CD61画门, 找出血小板, 避免杂志碎片干扰, 检测血小板亚群灵敏度高, 用血量少, 无放射污染

  检测项目:1PAC—1:早期PLT活化的标志物, 即活化的gpII/IIIa复合物, 抗体与活化PLT膜表面的gpII/IIIa复合物。

  2 CD62P:PLT活化后期的标志物, 特异德育活化的PLT结合, 静止的PLT胞浆内颗粒含有CD62P, PLT活化后, 颗粒内糖蛋白内膜外释放, PLT表达CD62P。

  3 CD61:特异的泛血小板表面标记, 即于活化后的血小板结合, 也于为活化的血小板结合, CD61与CD41联合, 即为血小板表面gpIIb/IIIa复合物。

  临床应用:

  1. 缺血性冠状动脉疾病: 若心绞痛, 心肌梗塞, 血管成形术, 心肺旁路术等

  2. 缺血性脑血管病: 如脑梗塞, TIA, 脑动脉硬化等

  3. 糖尿病, 恶性肿瘤

  4. 高血压, 高脂蛋白血症, 高粘滞血症

  5. 抗血小板药物机制研究与疗效检测

  6. 吸烟, 情绪应急

  标本: 枸橼酸钠抗凝的全血2ml


TAG: 流式细胞术

 

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