紫外一可见分光光度计在药物分析中是必不可少的分析仪器,我们现就仪器的安装,调试,维
修和测试中碰到的问题向操作者提出儿点建议.
1应注意的问题
1.1 仪器光度的线性
众所周知,光吸收分析必须符合郎伯一比尔定律的线性关系.仪器光度线性程度与光源能量
的强弱,接收器光信号最低检出限,最高接收能力和单色的质量,性能有关.我们用溶液稀释法检
在仪器的光度线性.选择校正的石英试样池.用0.05mo1/L硫酸溶液为空白,按药典规定波长在
350nm, 313nm, 257nm.
235nm测A值(单光束仪器测出T值后再换算成A值),再根据各点的浓度
计算出各点的吸收系数r,.在座标纸上,以各点的吸收度A为横座标,相应的吸收系数厂.为纵
座标,绘出4个波长的吸收系数一吸光度曲线,我们对9台不同厂家生产的仪器进行测试,结果见
图1,
12光度准确性
1.2.1光度误差在日常使用中,往往是光度准确性与重现性困难测试者.要测得正确可靠的数
据取次于①样品来源.②制样技术(包括称量,容量,溶剂试剂,pH值,时间,温度等)③试样池
质量(试样架位置,池质量等).④仪器本身的性能(光学系统性能,放大器稳定性和线性,接收
器的线性及噪声水平,机械系统或计算机对仪器控制能力等).⑤仪器操作(基线校零空白对照等).
1.2.2定里分析法选择合适的计算方法,尤其是在计算法中有导数表示,联立方程等,最常用的标
准曲线法用此法是因样品线性较差,其影响因素多,如在波长在相当大的幅度内变化不定且易产生
较大误差时,才用标准曲线法.如果因无标准或其它原因,借用别人在其它环境, 其它仪器测得的
标准曲线直接引用,那么其误差是可想而知的.
2讨论和建议
2. 1测定光度曲线的线性
光度线性是在于E. 的平均值〔以药典的附录为依据即E"---124.50( X 235nm) ;
刀,一144. 00 ( X 257nm):厂,一48.62(a
313nm):刀,..二106.6(350nm)偏差不超过士0.1%的一段坪区
为这台仪器的线性范围或最佳工作范围.我们对不同档次的9台仪器进行测试光度线性,有的A值
在0. 20^-0. 5 (1. 5)间;有的A值在0. 20^-2. 5 (3. 5)间:有的A值在0. 13--3.
5间,这一结果表明
仪器档次越高吸光度A值线性越宽.操作者应对其仪器的线性有所了解.
9 台仪器的E-A曲线图形并不一致,这是由仪器光路特性决定,在线性坪区的两端,有6台仪器是
2003年实验室管理科学研讨会论文集
低浓度时向上翘,高浓度时向下翘,有2台仪器是高低浓度都向下翘,有2台仪器的四个浓度的E-A
曲线上下翘的方向不一致.同一样品在浓度较低的情况下, 当A值小于0. 15以下时,在不同仪器
测得A值误差就大.例如红花黄素吸收度A在岛津UV-200测A值为0. 112(正好在曲线下限低于平
均值),在DMS200型测A值等于0. 186(曲线下限高于平均值),那么就会出现两台测得值相差为60
0n以上.因而测试者都应力求将样品浓度控制在0. 2-1. 5A之间.线性范围最可靠.尤其在一些复
方药品中,受提取或显色反应的影响连对照品的A值都在0. 1左右,那么测得的样品数据没有任何
定量意义.测试中很多测试者都将此光度线性忽略.
2. 2光度误差是综合性误差作为测试者如果无法掌握上述0102(3)(47条那么就必须作好逗鱼两
条.正确制备试样,正确操作仪器和正确选择样品最佳测试方法就尤重要了.
2. 3在定量分析中有计算法对照品法和吸收系数法计算法应对其概念能清,对于智能型仪器所给
参数应合理选择,避免系统误差的代入;对照品法是用对照品与测试样品比较,操作简便,对仪器
的操作要求不高,甚至有些时候对空白对照的要求很小,在同等条件下,测定结果误差小,在国外的
文献上基本用此法,但对照品的来源标化和公认性要求高,取样量和稀释倍数不能太小;吸收系数法
(绝对值法)由于对照品不易得到且纯度是值得考虑的问题,就我国现状来说用E",,值法,各地作的
结果都很稳定重现性好,在单一成分的测定中是首选方法,但使用 E'%.值法时,操作人员必须严格遵
循操作规程,依照郎伯一比尔定律.
3结束语 总之对紫外一可见分光光度计的使用,除使用计量检定合格的仪器外,还应了解这台仅器的
性能和对所测试样的适应程度,才能在药物研究,药品标准制定,标准修改及检验过程中不出现由
于使用不当对结果带来大的误差.只要略加用心,认真读通使用说明书,就可免去一些不必要的误
差,使其测试数据正确可靠.
出口玉米中杀螟松残留量快速测定法
