液相色谱柱柱效测试方法

效液相色谱仪（美国Waters），包括600E四元泵、DEGASSER脱气机、2707自动进样器、2489紫外检测器；Milli-Q超纯水仪（美国Milli-Pore公司）。 乙苯，色标，中西集团；苯甲酸甲酯，色标，中西集团； 乙腈，色谱纯，Merk试剂公司；正己烷，色谱纯，国药集团化学试剂公司；乙酸乙酯，色谱纯，Fisher试剂公司；超纯水，Milli-Q超纯水仪制备。 1.2 实验方法 1.2.1 柱效测试液的配制     用微型移液枪移取50µL乙基苯和10µL苯甲酸甲酯于10mL容量瓶中，用乙腈定容，过0.45µm滤膜，即得反相色谱柱柱效测试液。 用微型移液枪移取50µL乙基苯和10µL苯甲酸甲酯于10mL容量瓶中，用正己烷定容，过0.45µm滤膜，即得正相色谱柱柱效测试液。 1.2.2 色谱条件 (1) 反相色谱柱柱效测试色谱条件   流动相：60%乙腈-40%水；   流速：1.0 mL﹒min-1；   进样体积：10μL。   柱温：室温；   检测波长：UV254nm； (2) 正相色谱柱柱效测试色谱条件   流动相：90%正己烷-10%乙酸乙酯；   流速：1.0 mL﹒min-1；   进样体积：10μL。   柱温：室温；   检测波长：UV254nm； 1.2.3 实验过程     待系统平衡好后，进样采集数据后进行积分处理。 2 实验结果 2.1 色谱图   采用反相色谱柱柱效测试方法测试WATERS Xterra RP18柱的柱效，采集 的色谱图见图1。

图1 WATERS Xterra RP18柱柱效测试色谱图 采用正相色谱柱柱效测试方法测试AGILENT Carbohydrate柱 （氨基柱）的柱效，采集的色谱图见图2。

图2 AGILENT Carbohydrate柱柱效测试色谱图

2.2 柱效计算   采用软件自带的数据处理功能对上述色谱图进行积分处理，并根据以下公式计算各组分峰的柱效： 计算结果分别见表1和表2。

表1 WATERS Xterra RP18柱效测试结果

组分	保留时间	面积	峰高	塔板数(N)
乙基苯	3.483	3410367	422732	4216.2
苯甲酸甲酯	5.960	5131259	472002	6798.5

表2 AGILENT Carbohydrate柱效测试结果

组分	保留时间	面积	峰高	塔板数(N)
乙基苯	2.204	6691937	1156673	3282.6
苯甲酸甲酯	3.364	3581786	538812	5792.5

备注：一般柱效达2000以上即可很好的定量。 3 讨论 n     在色谱系统安装不同的色谱柱后，采集乙基苯（0.5% v/v）和苯甲酸甲酯（0.1% v/v）混合样品的色谱图，并计算色谱柱柱效的方法是一种通用型色谱柱柱 效测试法，不仅适用于反相键合相色谱柱，而且适用于正相键合相色谱柱； n     对反相色谱柱，建议以乙腈－水混合溶液做洗脱剂，本例采用60%乙腈－40%水混合溶液；对于正相色谱柱，建议以正己烷－乙酸乙酯 混合溶液做洗脱剂，本例采用90%正己烷－10%乙酸乙酯混合溶液； n     本测试结果不能用于新购色谱柱性能达标与否的判据，可用于跟踪色谱柱使用一段时间后性能变化情况。若要判定新购色谱柱性能是否达标，请按照色谱柱供应商提 供的方法进行测试。