分离类型
八种分离类型,介绍常用的几种;
根据试样性质不同,采用不同的分离类型;
每种机理的选择性不同;
一,毛细管区带电泳
capillary zone electrophoresis ,CZE
带电粒子的迁移速度=电泳和电渗流速度的矢量和.
正离子:两种效应的运动方向一致,在负极最先流出;
中性粒子:无电泳现象,受电渗流影响,在阳离子后流出;
阴离子:两种效应的运动方向相反;ν电渗流
>ν电泳时,阴离子在负极最后流出,在这种情况下,不但可以按类分离,同种类离子由于差速迁移被相互分离.
最基本,应用广的分离模式;
二,毛细管凝胶电泳
capillary gel electrophoresis ,CGE
将聚丙烯酰胺等在毛细管柱内交联生成凝胶.
其具有多孔性,类似分子筛的作用,试样分子按大小分离.能够有效减小组分扩散,所得峰型尖锐,分离效率高.
蛋白质,DNA等的电荷/质量比与分子大小无关,CZE模式很难分离,采用CGE能获得良好分离,DAN排序的重要手段.
特点:抗对流性好,散热性好,分离度极高.
无胶筛分技术:采用低粘度的线性聚合物溶液代替高粘度交联聚丙烯酰胺.柱便宜,易制备.
三, 胶束电动毛细管色谱(MECC ,MEKC)
micellar electrokinetic capillary
chromatography,MEKC
1.缓冲溶液中加入离子型表面活性剂,其浓度达到临界浓度,形成一疏水内核,外部带负电的胶束.
在电场力的作用下,胶束在柱中移动.
2. 电泳流和电渗流的方向相反,且ν电渗流 > ν电泳 ,负电胶束以较慢的速度向负极移动;
5. 色谱与电泳分离模式的结合.
3.中性分子在胶束相和溶液(水相)间分配,疏水性强的组分与胶束结合的较牢,流出时间长;
4.可用来分离中性物质,扩展了高效毛细管电泳的应用范围;
四,毛细管等电聚焦
capillary isoelectric focusing,CIEF
1. 根据等电点差别分离生物大分子的高分辨率电泳技术;
2.
毛细管内充有两性电解质(合成的具有不同等电点范围的脂肪族多胺基多羧酸混合物),当施加直流电压(6～8V)时,管内将建立一个由阳极到阴极逐步升高的
pH梯度;
3.
氨基酸,蛋白质,多肽等的所带电荷与溶液pH有关,在酸性溶液中带正电荷,反之带负电荷.在其等电点时,呈电中性,淌度为零;
4.
聚焦:具有不同等电点的生物试样在电场力的作用下迁移,分别到达满足其等电点pH的位置时,呈电中性,停止移动,形成窄溶质带而相互分离;
5. 阳极端装稀磷酸溶液,阴极端装稀NaOH溶液;
6. 加压将毛细管内分离后的溶液推出经过检测器检测;
7. 电渗流在CIEF中不利,应消除或减小.
五,毛细管等速电泳
capillary isotachophoresis ,CITP
1.
将两种淌度差别很大的缓冲液分别作为前导离子(充满毛细管)和尾随离子,试样离子的淌度全部位于两者之间,并以同一速度移动.
2.
负离子分析时,前导电解质的淌度大于试样中所有负离子的.所有试样都按前导离子的速度等速向阳极前进,逐渐形成各自独立的区带而分离.阴极进样,阳极检测.
capillary isotachophoresis ,CITP
3. 不同离子的淌度不同,所形成区带的电场强度不同(ν=μE),淌度大的离子区带电场强度小;
沿出口到进口,将不同区带依次排序1,2,3,4
电场强度依次增大.假设"2"号中离子扩散到"3"号,该区电场强度大,离子被加速,返回到"2"区;当"2"号中离子跑到"1"号区,离子被减速使之归队;
4. 特点:界面明显,富集,浓缩作用;
六,毛细管电渗色谱
capillary electroosmostic chromatography ,CEC
在毛细管壁上键合或涂渍高效液相色谱的固定液,以电渗流为流动相,试样组分在两相间的分配为分离机理的电动色谱过程;
