目 录
1、概述
2、验证目的
3、验证实施小组成员及有关责任
4、验证文件
5、合格标准
6、验证方法和步骤
7、验证结果分析和综合评价
8、最终评价
9、验证周期
10、验证记录
1、概述
高效液相色谱法(High Performance Liquid
Chromatography，HPLC)是一种现代液相色谱法，其基本方法是用高压输液泵将流动相泵入到装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图并进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。
高效液相色谱仪由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成。其中LC-2010和
Agilent1100型为单泵型，LC-20AB型为双泵型高效液相色谱仪。
2、验证目的
检查并确认高效液相色谱仪运行性能符合要求。
3、验证实施小组成员及有关责任
验证实施小组组长???负责协调及异常情况的处理;操作员??????负责验证的具体操作工作;QA???负责监督实施本方案。
4、主要验证文件
高效液相色谱法(SOP-ZL-???)、
中华人民共和国国家计量检定规程 液相色谱仪(JJG705-2002)、
UV-VIS检测器SPD-20A/SPD-20AV说明书、
溶液传输单元LC-20AB说明书、
中华人民共和国药典2005年版二部、
LC-2010A/2010C操作说明书 安装手册和维修手册。
5、合格标准
验证部件 验证项目 合格标准
输液泵 流量设定值误差SS
0.5ml/min:<5%;1.0ml/min:<3%;2.0ml/min:<2%
流量稳定性误差SR
0.5ml/min:<3%;1.0ml/min:<2%;2.0ml/min:<2%
柱温箱 柱箱温度设定值误差ΔTS <±2℃
柱箱控温稳定性TC ≤1℃
自动进样器 进样量准确度误差 ≤±2%
检测器 基线噪声 ≤ 2×10-5AU
最小检测浓度 ≤1×10-7g/mL(萘的甲醇溶液)
基线漂移 ≤5×10-4AU/h
整机性能 定性测量重复性误差 RSD≤0.5%
定量测量重复性误差 RSD≤1.0%
6、验证方法和步骤
6.1验证方法
整个验证过程分为单个部件的验证和整机验证。验证时一般先验证泵、柱温箱、自动进样器的性能，接着是检测器的性能，最后是整机的性能验证。
6.2验证步骤
6.2.1输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定
将仪器的输液系统，进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，流量设为1.0mL/min，按说明书启动仪器，待压力平稳后保持10分钟，按表1设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确地收集，称重。按式(1)、式(2)计算
SS和 SR。
表1
流量设定值(mL/min) 0.5 1.0 2.0
测量次数 3 3 3
流动相收集时间(min) 10 5 5
SS=(Fm-FS)/FS×100%……(1)
SR= (Fmax-Fmin)/F×100%……(2)
式中：SS——流量设定值误差(%);
SR——流量稳定性误差(%);
Fm= (W2-W1)/ ρT•t，流量实测值(mL/min);
W2——容量瓶+流动相的重量(g);
W1——容量瓶的重量(g);
FS ——流量设定值(mL/min);
ρT——实验温度下流动相的密度(g/cm3);
t——收集流动相的时间(min);
Fmax ——同一组测量中流量最大值(mL/min);
Fmin——同一组测量中流量最小值(mL/min);
F——同一组测量值的算术平均值 (mL/min)。
输液泵泵流量设定值误差SS、流量稳定性误差SR的检定记录见附录一
6.2.2柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定
将数字温度计探头固定在柱温箱内，选择35℃和45℃进行检定。按仪器说明书操作，通电升温，待温度稳定后，记下温度计读数并开始计时，以后每隔10min记录一次读数，共计7次，求出平均值。平均值与设定值之差为ΔTS，7次读数中最大值与最小值之差为控温稳定性TC。
柱温箱柱箱温度设定值误差ΔTS和控温稳定性TC的检定原始记录见附录二。
