微量测序的SDS-PAGE电转印方法微量测序的SDS-PAGE电转印方法

微量测序的SDS-PAGE电转印方法微量测序的SDS-PAGE电转印方法 

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 材料
PVDF膜(polyvinylidene difluoride), 美国ABI 公司  CAPS[3-(cyclohexylamino)-1-propane sulfonic acids], SIGMA  实验所用的各种溶剂和试剂均为分析纯或色谱纯。   

1. 电泳  100pmol的蛋白样品上样于SDS-PAGE上，用15%分离胶和5%浓缩 13mA下电泳4小时。 

2. 电转印  电泳后将凝胶浸泡在10mMCAPS缓冲液中, 以漂洗去表面的Tris 和Gly。将在CAPS缓冲液中浸泡过的多层滤纸与胶、PVDF膜做成“夹 心”, 置于半干转印仪中, 在1.6mA/cm2下转印1小时、取出PVDF膜,  用水漂洗后, 用0.1%考马斯亮蓝R-250染色1分钟, 50%甲醇溶液脱色约5～10分钟, 可见蛋白条带, 蒸馏水洗涤后, 在空气中干燥,-20°C保存备用。
 
 　
 

   
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