2020.9.08
2、puc质粒载体
1987年,j.messing和j.vieria采用mcs技术在pbr322基础上构建的。
(1)来自于pbr322的ori
(2)氨苄青霉素的抗性基因(ampr)。但核苷酸序列发生了变化
(3) lacz′基因
编码β—半乳糖酶的α—肽链即氨基末端。
(4)mcs区段
是一段用于插入外源dna片段的特定区域,由一系列的紧密相连的限制性内切酶位点组成,而且每个限制性内切酶位点在整个载体中是唯一的。
与pbr322相比, puc质粒载体优点:
(1)具有更小的分子量和更高的拷贝数
如puc8为2 750bp,pucl8为2 686bp,控制质粒复制rop基因的缺失,平均每个细胞即可达500~700个拷贝
(2)适用于组织化学法检测重组体
通过a-互补作用,利用菌落颜色筛选重组子。
(3)具有多克隆位点区段(mcs)
可以定向克隆防止载体自我连接。
二、......
......
③具有插入失活的筛选标记,理想的质粒载体应具有两种抗菌素抗性标志,如氨苄青霉素抗性基因(Ampr)和四环素抗性基因(Tetr)等,以便从平板中直接筛选阳性重组子。④...
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2、 根据质粒基因型 和受体菌基因型互补原则而定; 重组子的筛选方法常用的有两种方法: 1、 抗生素筛选法:菌株为某种抗生缺陷型, 而质粒上带有该抗性基因(如氨苄...
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1、客户应提供含有质粒的菌种,如果提供质粒DNA,应保证质粒DNA≥100ng,并需要收取转化技术服务费用(100元/次)。 2、客户应提供质粒的抗性说明,如果为非氨苄青霉素、卡那霉素抗性的,请提
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