小师弟最近接了一个新项目，根据实验室师兄师姐的经验传授，选择了1/3截留分子量的超滤膜孔径截留新得到的重组抗体蛋白，但是却总感觉回收率不佳……
是不是这个批次的超滤管有问题？于是小师弟换了批次，结果仍然回收率不高。最后，小师弟求助了膜过滤和超滤的专家小赛。
根据经验，小赛建议他试用同样截留分子量的Hydrosart和RC膜材质的超滤管，结果，回收率果然就有了很大的提升！
由于超滤管使用不恰当或是超滤知识缺乏引起的问题，简直成了实验汪们蛋白实验不成功、效率低下的最常见原因之一。
上周的《这些超滤离心管的使用问题你都遇到过吗？》一经发出，好多小伙伴纷纷下载和申请试用。除此之外，还有哪些问题困扰着实验小白呢？
Q
有时候我用超滤离心管连水都离不下来，可能的原因是？
A
超过滤薄膜含有微量甘油。如果出现这种情况，先用0.1 N NaOH 清洗再离心。最后用缓冲液或去离子水水再次清洗后甩干。清洗后的滤膜应立即使用，如暂时不用，请保持润湿状态，避免重新干燥。另外， 有些水的水质本身杂质较多，或是不同水机对水的处理效果有差异，这个时候可以检查是否水机工作正常，然后用 0.2um 的针头滤器过滤水，然后再进行超滤，效果可能会好很多！
Q
在浓缩过程中如何减少蛋白质降解？
A
在浓缩过程中，不均衡的蛋白质、pH/样品缓冲液条件以及高剪切应力通常会导致降解产生。同样的，蛋白质的形状越呈线性，高离心力对结构的不利影响就越大。如果蛋白质呈线性、浓缩时间较慢，且离心力低于建议的最大值（约 50 % 较好），则影响会较小。对于更多的球状分子，建议使用最接近最小样品量的装置，这样可确保更大的表面积、减少堵塞概率并增加样品上的力。
尽管如此，您还应注意：如果您的蛋白质超滤膜材质选择不合适，或者您的蛋白质具有“粘性”，则表面积越大，非特异性结合的比率就会越高。诸如Vivaflow® 膜包等实验室用切向流膜包可为样品提供真正的平行流路，能够进一步确保最小的剪切应力。应注意的是，一般的搅拌细胞容器会施加相对较大的剪切应力。
对于pH/缓冲液条件，一旦选择了最优的缓冲液pH 条件，就应该在整个浓缩置换过程中维持这个条件。使用Vivaflow® 装置和离心式Vivaspin® 20 可以轻松进行缓冲液置换，即使浓度增加也可以保持正确的缓冲液平衡，您也可以在需要时添加新的缓冲液。
Q
可以用超滤管控制浓缩倍数吗？
A
首先，Vivaspin® 超滤管有最小回收体积，保证至少回收 30 μl的样本，并且不会让过长的离心时间导致样品干燥。另外，Vivaspin® Turbo 系列的尖角死体积回收器可以让小体积样品得到最大的回收。
另外，如果需要浓缩一定的倍数，使用超滤管也可以直接完成，不需要额外的步骤。首先，预先计算外管液体达到滤过孔的刻度线的位置需要的体积，然后减去样品要滤出的体积，就是需要预先加入外管的缓冲液的体积。先在外管中加入计算得到的缓冲液，待滤出液的体积流入外管缓冲液中，使液面达到滤出孔，则样品不再浓缩，浓缩倍数得到了固定，样品浓缩就是那么简单。
想了解更多的超滤注意事项，可以戳下面的按钮获取精编完整版《实验室超滤常见问题》哦！（悄悄说一句，现在还有试用活动进行中，可以免费获得RC超滤管一支~）
获取手册/试用
首页
